1.概述：室溫下，大大都份子處于基態的最低振動能級，處于基態的份子接收能量（光能、化學能、電能或熱能）后躍遷至激起態，激起態不不變，將很快衰變到基態，以光的情勢放出能量，這類景象稱為“發光景象”。份子發光包含熒光，磷光，化學發光，生物發光等。遭到光照時發光，光照堵截時發光當即消逝的叫熒光，光照堵截時，發光逐步變弱乃至消逝的叫磷光，接收化學反映的化學能量而發光求乞學發光，由生物能轉變為光輻射的稱作生物發光。
由于發光物資差別熒光有份子熒光和原子熒光之分，份子熒光為帶光譜，原子熒光為線光譜，凡是所說的熒光為份子熒光。經由進程測定所發射熒光的特征和強度，能夠對物資停止定性、定量闡發。
2.熒光檢測手藝
2.1熒光強度（FI）：熒光強度與熒光物資的濃度成反比，這是熒光闡發法是量闡發的按照。在生物學上的操縱很是普遍，能夠停止生物大份子定量，酶活性闡發，熒光免疫闡發，細胞學闡發（細胞增殖，細胞毒理，細胞吸附等）和份子間彼此感化。
2.1.1細胞凋亡檢測：Caspase家屬在介導細胞凋亡的進程中起著很是首要的感化，此中Caspase-3為關頭的履行份子，它在凋亡旌旗燈號傳導的很多路子中闡揚功效。Caspase-3一般以酶原（32KD）的情勢存在于胞漿中，在凋亡的初期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17KD）和兩個小 亞基（12KD）構成，裂解響應的胞漿胞核底物，終究致使細胞凋亡。但在細胞凋亡的早期和滅亡細胞，caspase-3的活性較著降落。
設想出熒光物資偶聯的短肽Z-DEVD-AMC。在共價偶聯時，AMC不能被激起熒光，短肽被水解后開釋出AMC，自在的AMC能力被激起發射熒光。按照開釋的AMC熒光強度的巨細，能夠測定 caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的水平。
2.1.2細胞毒性的檢測：體外細胞毒性研討對檢測新的生物來歷或野生分解的細胞毒素和例行的臨床相干的檢測都有著首要的意思。細胞膜非滲入性的核染料 Propidium iodide能穿透毀傷的細胞膜，熒光密度越高反映出其受損細胞越多。
2.1.3鈣流檢測：Fura-2、indo-1、Quin-2是Ca2+熒光唆使劑，能夠活絡地反映細胞內鈣離子濃度的變更，當連系鈣離子時，最大激起波長會發生轉變，發射熒光的強度和連系的Ca2+濃度有著定量的干系。
2.2熒光偏振（FP）：1926年Perrin起首描寫了熒光偏振實際，溶液中的熒光份子在遭到偏振光照射時，可接收并開釋出響應的偏振熒光，若是在激起時熒光物資處于活動狀況，發射光將堅持原有激起光的偏振性，若是其處于活動狀況，發射光電偏振偏振立體將差別于原有激起光的偏振特征，這便是熒光偏振景象，熒光份子與別的因子的彼此感化，比方彼此連系或排擠；其所處情況的性子，比方溶液的粘度、溫度等，這些身分都有能夠對這個熒光因子受激起后發出的發射光的發射立體發生影響。是以以熒光偏振為根本成長的手藝可用來研討性命迷信中份子之間的彼此感化，如受體配體連系闡發，DNA－卵白質連系闡發，SNP闡發，酶活性闡發。
熒光偏振闡發所需的樣品量少，活絡度高，可達亞納摩爾級規模，反復性好，操縱簡潔，也更加寧靜靠得住，不會在嘗試進程中天生無害的噴射性廢料，別的熒光偏振是真正均相的，許可及時檢測（能源學檢測），對濃度變更不敏感，是均相檢測情勢（中間不含洗濯步驟）的最益處理計劃。
2.3時辰分辯熒光（TRF）：在做熒光測定的時辰，由于背景熒光旌旗燈號攪擾，操縱傳統的發色團進而停止熒光檢測的活絡度就會嚴峻降落。大局部背景熒光旌旗燈號是短時存在的，是以操縱長衰減壽命的標記物就能夠使剎時熒光攪擾減到最小化。
時辰分辯熒光是用稀土元素作為標記物，稀土三價離子的電子云的布局會必然水平下限制了電子的遷徙，致使這類元素發生的熒光的衰減周期凡是是很長的，從而消弭背景熒光的攪擾 大大進步檢測的活絡度（表2）。操縱稀土元素作標記物的別的一個益處是激起光與發射光峰值Stoke 位移大。這便可消弭激起光和散射光的攪擾，同時, 被激起的熒光光帶極窄, 熒光的發射峰很是鋒利, 可以使儀器調劑在極窄的波長規模內測定, 極大地下降了來自背景的各類攪擾。
熒光團　　　　　　　　熒光壽命（ns）
非特異熒光原型　　　　1～10
人血美觀卵白　　　　　4.1
球卵白　　　　　　　　3.0
細胞色素C　　　　　　3.5
異硫氰酸熒光素（FITC）4.5
丹磺酰氯　　　　　　　14
稀土元素螯合物　　　　　　103～106
2.4熒光共振能量通報（FRET）：熒光共振能量通報景象是Perrin在20世紀初起首發明的，1948年，Foster創建了實際道理，指熒光能量供體與受體間經由進程偶極－偶極耦協感化轉移能量的進程，這類能量的轉移長短噴射性的，發生FRET的前提首要有三個：（1）供體與受體間充足接近（1～10 nm）；（2）供體的發射光譜與受體的激起光譜有必然的堆疊；（3）給體與受體的偶極具必然的空間取向，這是偶極－偶極耦協感化的前提。
熒光共振能量通報由于要斟酌到供體和受體之間的間隔，以是常常用來研討份子間的彼此感化，像卵白質的彼此感化，抗原抗體連系，受體與配體的連系，別的在膜反映、離子通道等方面的研討也有響應操縱。將FRET熒光探針標記的肽鏈，插手到固體外表的雙層膜中，經由進程熒光漂白規復（FRAP）成像手藝檢測，為研討跨膜螺旋二聚感化供給一個新的方式。用FRET標記細胞質，操縱時辰分辯手藝，檢測其對P2X離子通道的門控感化。
操縱Eu等長效熒光物資作為供體，來停止熒光共振能量通報，在激起光燃燒后受體仍能較長的能量衰減時辰，能量通報效力更高，可檢測的彼此感化間隔更長，可達到100-200nm，時辰提早檢測，下降了背景樂音，進步了活絡度。