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免疫組化染色題目處置計劃

[2013/12/3]
　　染色過強緣由 處置方式

　　a 抗體濃度太高或孵育時候太長 下降抗體滴度、抗體孵育時候：室溫1小時或4渡留宿

　　b 孵育溫度太高跨越37度 普通在室溫20-28

　　c DAB顯色時候太長或濃度太高 顯色時候不跨越5-12分鐘，以顯微鏡下察看為準

　　2、非特同性背景染色

　　緣由 處置方式

　　a 操縱進程中沖刷不充實 每步沖刷3次每次5分鐘

　　b 構造中含過氧化物酶未阻斷 可再設置裝備擺設新穎3%H2O2封鎖孵育時候耽誤

　　c 構造中含內原性生物素 一般非免疫植物血清再封鎖

　　d 血清卵白封鎖不充實 耽誤血清卵白封鎖時候

　　3、染色弱

　　緣由 處置方式

　　a 抗體濃渡太低、孵育時候太短 進步抗體濃度、孵育時候不能少 于60分鐘

　　b 試劑跨越有用利用時候 應改換試劑

　　c 操縱中增添試劑時緩沖液未瀝干 每步滴加試劑前瀝干切片中過剩的緩沖液　　使試劑濃縮 (應避免切片枯燥)

　　d 室溫太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱留宿

　　e 卵白封鎖過分 封鎖不要跨越12分鐘

　　4、染色陽性

　　緣由 處置方式

　　a 操縱步驟毛病 應重試 設陽性對比

　　b 構造中無抗原 設陽性對比以考證嘗試成果

　　c 一抗與二抗種屬毗連毛病 細心肯定一抗二抗種屬無誤