人凝血酶(human thrombin)是1種絲氨酸卵白酶，首要功效在于將可溶性的纖維卵白原水解成不溶性的纖維卵白，是以在止血和凝血、構造修復和創傷愈合等方面有首要感化[1，2]。一般環境下，人血液輪回中的凝血酶以非活化的情勢存在，即凝血酶原，經由過程水解酶感化，首要轉換成具備活化情勢的α�材�血酶，另外另有β�埠挺锚材�血酶[3]。α�材�血酶在凝血酶中含量>97%，由1條3 kD的輕鏈和另1條31 kD的重鏈經由過程二硫鍵毗連而成，具備普遍的心理學活性，如水解纖維卵白原構成纖維卵白凝塊，到場凝血因子Ⅴ和Ⅷ的激活，經由過程激活因子��起到不變纖維卵白的感化，在凝血酶原激酶感化下起到激活卵白C的抗凝血感化;另外，它還經由過程激活血小板上的凝血酶受體來安慰血小板的堆積[4]。因為凝血酶在止血與凝血、構造修復等方面起到極大的感化，已成為國際外研討的核心。咱們現就人凝血酶的制備手藝、病毒滅活及相干操縱研討綜述以下。

　　制備手藝

　　1.1 牢固化肝素親和層析 Nordenman等[5]將牢固化肝素的瓊脂糖凝膠用于人凝血酶的分手純化，從電泳成果可知該方式制備的人凝血酶純度較高。外洋有研討者以新穎血漿做質料，經蛇毒激活凝血酶原和肝素�睸epharose CL��6B親和層析柱后，1 L血漿可取得純度>97%、比活性為4 600 IU/mg的α�材�血酶25 mg[6]。陳紅兵等[7]經由過程凝血酶原提取、激活和肝素�睸epharose CL��6B親和層析等步驟，從枸櫞酸鹽抗凝血漿平分手出收受接管率為87%，比活性到達4 715 IU/mg的人凝血酶。這些報道標明，用肝素親和層析分手人凝血酶，不只可取得高純的制劑，同時可簡化制備步驟和延長分手純化時候。可是因為親和凝膠價錢高貴，到今朝為止還沒有用于凝血酶的大范圍制備。

　　1.2 離子互換層析 最近幾年來，因為具備疾速、挑選性好及出格適于大致積樣品純化等長處，離子互換層析在人凝血酶的分手純化中取得普遍操縱。Zhigniew等[8]用SP�睸pherodex陽離子互換層析對富含凝血酶的質料分手純化，成果標明該類互換劑對凝血酶有很好的挑選性，純化后的牛凝血酶和人凝血酶的酶活氣別離到達2 300和1 150 IU/mg，2種凝血酶的收受接管率都到達了70%—90%。孫文種等[9]用CM�睸epharose陽離子互換層析從Nitschmarm組分B平分手凝血酶，經分手后凝血酶比活為195 IU/mg，收受接管率77.9%。Catherine等[10]以冷積淀上清為質料，先用DEAE�瞫ephadex A50 吸附取得57.5 IU/ml凝血酶原復合物，而后用CaCl2激活取得345 IU/ml的凝血酶，并將凝血酶上SP�睸epharose F.F.陽離子互換柱，終究取得凝血酶的比活性為1 150 IU/mg。健康等[11]為從Cohn組分Ⅲ中獲得人凝血酶，順次用PEG積淀、DEAE�瞫ephadex A50離子互換層析和SP�睸epharose F.F.層析等步驟，最初制得純度和比活性較高的成品，現已上市。Amal等[12]以凝血酶原激酶激活的富含凝血酶的血漿上清為質料，用DEAE�睸epharose陰離子互換劑做開端純化后，進一步用CM�睸epharose陽離子互換分手，制備出超高純的凝血酶，其凝血酶的比活性為(9 200—12 650)IU/mg。因為離子互換層析具備操縱簡略，耗時短，本錢絕對較高等長處，使得凝血酶范圍化出產成為實際。

　　1.3 多重色譜層析聯用 從已有的文獻報道來看，制備人凝血酶的質料有冷積淀上清、Cohn 組分Ⅲ和凝血酶原復合物等;但這些質猜中除人凝血酶原外，還含有具備醫治意思的別的血漿卵白，如FⅨ、卵白C，接納單一道理層析法制備人凝血酶時，沒法使這些無益成份取得綜合操縱。為此，外洋有公司按照各血漿卵白的理化性子的差別，接納差別道理的色譜聯用方式來分手純化凝血因子。以冷積淀上清為質料，別離接納DEAE陰離子互換層析、Heparin�睸epharose F.F.親和層析和金屬螯合層析分手出凝血酶原和FⅨ，將凝血酶原激活后，再用疏水層析純化出人凝血酶。此方式不只能制備出高比活性的凝血酶，并且能同時分手出別的的凝血因子(如FⅨ)，所制備的凝血酶比活性為2 400 IU/mg，遠高于Baxter公司的Tisseel成品(7.5 IU/mg)和OMRIX公司的Quixil成品(184 IU/mg)，并且如許的出產工藝可整合出產流程，下降出產用度，終究到達進步血漿卵白的操縱率的目標。但就今朝來看，該分手方式存在出產工藝龐雜、本錢太高等錯誤謬誤，短時間內鮮有范圍化出產的能夠。