食物中復原糖的測定體例：高錳酸鉀滴定法和間接滴定法。

　　一、高錳酸鉀滴定法

　　1.道理

　　樣品經撤除卵白質后，此中復原糖在堿性環境下將銅鹽復原為氧化亞銅，加硫酸鐵后，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸鉀溶液滴定氧化感化后天生的亞鐵鹽，按照高錳酸鉀耗損量計較氧化亞同含量，再查表得復原糖量。

　　2.合用規模

　　GB5009.7-85，本法合用于一切食物中復原糖的測定和經由進程酸水解或酶水解轉化成復原糖的非復原性糖類物資的測定。

　　3.儀器

　　(1) 滴定管

　　(2) 25ml古氏坩堝或G4垂融坩堝

　　(3) 真空泵

　　(4) 水浴鍋

　　4.試劑

　　除特別申明外，嘗試用水為蒸餾水，試劑為闡發純。

　　4.1 6 mol/L鹽酸：量取50ml鹽酸加水濃縮至100 ml。

　　4.2 甲基紅唆使劑：稱取10mg甲基紅，用100ml乙醇消融。

　　4.3 5 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉加水消融并濃縮至100ml。

　　4.4 堿性酒石酸銅甲液：稱取34.639g 硫酸銅(CuSO4·5H2O)，加適當水消融，加0.5ml硫酸，再加水濃縮至500ml，用精制石棉過濾。

　　4.5 堿性酒石酸銅乙液：稱取173g酒石酸鉀鈉與50g氫氧化鈉，加適當水消融，并濃縮至500ml，用精制石棉過濾，儲存于橡膠塞玻璃瓶中。

　　4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L鹽酸浸泡2～3天，用水洗凈，再加2.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2～3天，傾去溶液，再用熱堿性酒石酸銅已液浸泡數小時，用水洗凈。再以3 mol/L 鹽酸浸泡數小時，以水洗至不呈酸性。而后加水振搖，使成微細的漿狀軟縣委，用水浸泡并儲存于玻璃瓶中，便可用做添補古氏坩堝用。

　　4.7 0.1000mol/L高錳酸鉀規范溶液。

　　4.8 1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4g 氫氧化鈉，加水消融并濃縮至100ml。

　　4.9 硫酸鐵溶液：稱取50g硫酸鐵，插手200ml水消融后，漸漸插手100ml硫酸，冷卻后加水濃縮至1L。

　　4.10 3mol/L鹽酸：量取30ml鹽酸，加水濃縮至120ml。

　　5. 操縱體例

　　5.1 樣品處置：

　　5.1.1 乳類、乳成品及含卵白質的食物：稱取約0.5～2 g固體樣品(吸收2～10 ml液體樣品)，置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。插手10 ml堿性酒石酸銅甲液及4 ml1mol/L氫氧化鈉溶液，加水至刻度，混勻。靜置30min，用枯燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。(注：此步驟目標是積淀卵白)

　　5.1.2 酒精性飲料：吸收100 ml樣品，置于蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4后(注：若是蒸發時候太長，應注重堅持溶液pH為中性)，移入250 ml容量瓶中。加50 ml水，混勻。以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操縱。

　　5.1.3 含大批淀粉的食物：稱取2～10 g樣品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加熱1 h，并不時振搖。(注重：此步驟是使復原糖溶于水中，切忌溫度太高，由于淀粉在低溫前提下可糊化、水解，影響檢測成果。)冷卻后加水至刻度，混勻，靜置。吸收200 ml上清液于另外一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操縱。

　　5.1.4 含有脂肪的食物：稱取2～10 g樣品，先用乙醚或煤油醚淋洗3次，去除醚層。插手50ml水混勻，以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操縱。

　　5.1.5 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸收100 ml樣品置于蒸發皿中，在水浴上撤除二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗濯蒸發皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。

　　5.2 樣品測定：

　　吸收50ml處置后的樣品溶液，于400ml燒杯中，插手25ml堿性酒石酸銅甲液及25ml乙液，于燒杯上蓋一外表皿，加熱，節制在4min內沸騰，再精確煮沸2min，乘熱用鋪好石棉的古氏坩堝或G4垂融坩堝抽濾，并用60℃熱水洗濯燒杯及積淀，至洗液不成堿性為止。(注：復原糖與堿性酒石酸銅試劑的反應必然要在沸騰狀況下停止，沸騰時候需嚴酷節制。煮沸的溶液應堅持藍色，若是藍色消逝，申明復原糖含量太高，應將樣品溶液濃縮后重做。)將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400ml燒杯中，加25 ml硫酸鐵溶液及25ml水，用玻棒攪拌使氧化亞銅完整消融，以0.1mol/L高錳酸鉀規范液滴定至微紅色為起點。

　　同時吸收50ml水，加與測樣品時不異量的堿性酒石酸銅甲、乙液，硫酸鐵溶液及水，按同一體例做試劑空缺嘗試。

　　6. 計較：

　　X1=(V-V0)×N×71.54 (1)

　　式中： X1--樣品中復原糖品德相稱于氧化亞銅的品德，mg;

　　V--測定用樣品液耗損高錳酸鉀規范液的體積，ml;

　　V0--試劑空缺耗損高錳酸鉀規范液的體積，ml;

　　N--高錳酸鉀規范溶液的濃度;

　　71.54--1ml 1mol/L高錳酸鉀溶液相稱于氧化亞銅的品德，mg。

　　按照(1)式入彀較所得氧化亞銅品德，查附表"氧化亞銅品德相稱于葡萄糖、果糖、乳糖、轉化糖的品德表"，再計較樣品中復原糖含量。

　　X2=(m1×V2)∕(m2×V1)×(100∕1000) (2)

　　式中： X2--樣品中復原糖的含量，g/100g(g/100ml);

　　m1--查表得復原糖品德，mg;

　　m2--樣品品德(或體積)， g(ml);

　　V1--測定用樣品處置液的體積，ml;

　　V2--樣品處置后的全體積，ml。

　　7.舉例：

　　稱取某食物樣品3.00g，顛末處置后用水定容至250ml。取50ml停止測定，耗損0.1003 mol/L高錳酸鉀規范液5.20ml，同時測試劑空缺為0.36ml，則 樣品中復原糖品德相稱于氧化亞銅的品德為：

　　X1(mg) =(5.20-0.36)×0.1003×71.54 = 34.73

　　查表得復原糖品德為相稱于葡萄糖16.22 mg，

　　樣品中復原糖含量(以葡萄糖計)為：

　　X2(g/100g)=(16.22×250)∕(3.00×50)×(100∕1000)= 2.70

　　8.正文：

　　本法用堿性酒石酸銅溶液作為氧化劑。由于硫酸銅與氫氧化鈉反應可天生氫氧化銅積淀，氫氧化銅積淀可被酒石酸鉀鈉遲緩復原，析出少許氧化亞銅積淀，使氧化亞銅計量產生偏差，以是甲、乙試劑要別離配制及儲藏，用時等量夾雜。

　　二、間接滴定法

　　1.道理

　　樣品經撤除卵白質后，在加熱前提下，間接滴定已標定過的費林氏液，費林氏液被復原析出氧化亞銅后，適量的復原糖立行將次甲基藍復原，使藍色退色。按照樣品耗損體積，計較復原糖量。

　　2.合用規模

　　GB5009.7-85，本體例合用于一切食物中復原糖的檢測。檢出限0.1mg。

　　3.首要儀器

　　滴定管

　　4.試劑

　　除特別申明外，嘗試用水為蒸餾水，試劑為闡發純。

　　(1) 費林甲液：稱取15 g硫酸銅(CuSO4·5H2O)，及0.05 g次甲基藍，溶于水中并濃縮至1 L。

　　(2) 費林乙液：稱取50 g酒石酸鉀鈉與75 g氫氧化鈉，溶于水中，再插手4 g亞鐵 ，完整消融后，用水濃縮至500 ml，儲存于橡膠塞玻璃瓶內。

　　(3) 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3 ml冰乙酸，加水消融并濃縮至100 ml。

　　(4)亞鐵 溶液。稱取10.6g亞鐵 ，用水消融并濃縮至100ml。

　　(5) 鹽酸。

　　(6) 葡萄糖規范溶液：緊密稱取1.000 g顛末80 ℃枯燥至恒量的葡萄糖(純度在99%以上)，加水消融后插手5 ml鹽酸，并以水濃縮至1 L。此溶液相稱于1 mg/ml葡萄糖。(注：加鹽酸的目標是防腐，規范溶液也可用飽和苯甲酸溶液配制)

　　5.操縱體例

　　5.1樣品處置：

　　5.1.1乳類、乳成品及含卵白質的食物：稱取約0.5～2 g固體樣品(吸收2～10 ml液體樣品)，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊漸漸插手5 ml乙酸鋅溶液及5 ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用枯燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。(注重：乙酸鋅可去除卵白質、鞣質、樹脂等，使它們構成積淀，顛末濾撤除。若是鈣離子適量時，易與葡萄糖、果糖天生絡合物，使滴定速率遲緩;從而成果偏低，可向樣品中插手草酸粉，與鈣連系，構成積淀并過濾。)

　　5.1.2酒精性飲料：吸收50 ml樣品，置于蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4后，移入100 ml容量瓶中。加25 ml水，混勻。以下按4.1.1自"加5 ml乙酸鋅溶液"起依法操縱。

　　5.1.3含大批淀粉的食物：稱取2～5 g樣品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45℃水浴中加熱1 h，并不時振搖(注重：此步驟是使復原糖溶于水中，切忌溫度太高，由于淀粉在低溫前提下可糊化、水解，影響檢測成果。)。冷后加水至刻度，混勻，靜置。吸收50 ml上清液于另外一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自"5 ml乙酸鋅溶液"起依法操縱。

　　5.1.4汽水等含有二氧化碳的飲料：吸收50 ml樣品置于蒸發皿中，在水浴上撤除二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗濯蒸發皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。

　　(注重：樣品中濃縮的復原糖終究濃度應靠近于葡萄糖規范液的濃度。)

　　5. 2標定費林氏液溶液：吸收5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中(注重：甲液與乙液夾雜可天生氧化亞銅積淀，應將甲液插手乙液，使起頭天生的氧化亞銅積淀重溶)，加水10 ml，插手玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖規范溶液，節制在2 min內加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速率持續滴加葡萄糖規范溶液，直至溶液蘭色恰好褪去并呈現淡黃色為起點，記實耗損的葡萄糖規范溶液全體積，平行操縱三份，取其均勻值，計較每10 ml(甲、乙液各5 ml)堿性酒石酸銅溶液相稱于葡萄糖的品德(mg)。(注重：復原的次甲基藍易被氛圍中的氧氧化，規復成本來的藍色，以是滴定進程中必須堅持溶液成沸騰狀況，并且防止滴按時候太長。)

　　5.3樣品溶液展望：吸收5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，插手玻璃珠2粒，節制在2 min內加熱至沸，趁沸以先快后慢的速率，從滴定管中滴加樣品溶液，并堅持溶液沸騰狀況，待溶液色彩變淺時，以每秒1滴的速率滴定，直至溶液蘭色褪去，呈現亮黃色為起點。若是樣品液色彩較深，滴定起點則為蘭色褪去呈現敞亮色彩(如亮紅)，記實耗損樣液的全體積。(注重：若是滴定液的色彩變淺后復又變深，申明滴定適量，需從頭滴定。)

　　5.4樣品溶液測定：吸收5.0 ml堿性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，插手玻璃珠2粒，在2 min內加熱至沸，疾速從滴定管中滴加比展望體積少1 ml的樣品溶液，而后趁沸持續以每兩秒1滴的速率滴定直至起點。記實耗損樣液的全體積，同法平行操縱兩至三份，得出均勻耗損體積。

　　6.計較

　　X3 =(C×v1 × V)∕(m× v2 ×1000)×100

　　式中： X--樣品中復原糖的含量(以葡萄糖計)，%;

　　C--葡萄糖規范溶液的濃度，mg/ml;

　　v1-- 滴定10 ml費林氏溶液(甲、乙液各5 ml)耗損葡萄糖規范溶液的體積，ml;

　　v2--測按時均勻耗損樣品溶液的體積，ml;

　　V--樣品定容體積，ml;

　　m--樣品品德，g;

　　7.注重事變

　　(1) 本體例測定的是一類具備復原性子的糖，包含葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是成果用葡萄糖或其余轉化糖的體例表現，以是不能曲解為復原糖=葡萄糖或其余糖。但若是已知樣品中只含有某一種糖，如乳成品中的乳糖，則能夠以為復原糖=某糖。

　　(2)別離用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖規范品配制規范溶液別離滴定等量已標定的費林氏液，所耗損規范溶液的體積有所不同。證實即使同是復原糖，在歸天性子上仍有所不同，以是復原糖的成果只是反應樣品全體環境，并不完整即是各復原糖含量之和。若是已知樣品只含有某種復原糖，則應以該復原糖做規范品，成果為該復原糖的含量。若是樣品中復原糖的成份未知，或為多種復原糖的夾雜物，則以某種復原糖做規范品，成果以該復原糖計，但不代表該糖的實在含量。