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生化與份子生物學經常利用緩沖液的配制
[2013/10/8]
經常利用緩沖液:
TE
pH7.4
10mmol/LTrisCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTrisCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦稱TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
電泳緩沖液
Tris-乙酸(TAE):50×濃儲存液(每升):242gTri堿
5 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮50倍。
Tris-磷酸(TPE):10×濃儲存液(每升):108gTri堿
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮10倍。
Tris-硼酸(TBE):5×濃儲存液(每升):54gTri堿
27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮10倍。
堿性緩沖液:1×利用液(每升):5ml10mol/LaOH
2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸:5×濃儲存液(每升):15.1gTri堿
94g甘氨酸(電泳級)(pH8.3)
50ml10%SDS(電泳級)
2×SD凝膠加樣緩沖液
100mmol/LTris?HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)
4%SDS(電泳級)
0.2%溴酚藍
20%甘油
30%丙烯酰胺:
將29g丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于整體積為60ml的水中,加熱至37℃消融之,補加
水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中
保管于室溫。
10mol/L乙酸銨:
把770g乙酸銨消融于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。
1mol/LCaCl2:
在200ml純水中(Milli-Q水或相稱級別的水)消融54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份儲存于-20℃。
2.5mol/LCaCl2:
在20ml蒸餾水中消融13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份儲存于-20℃。
1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):
用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)消融3.09gDTT,過濾除菌后分裝成1ml小份儲存于-20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0):
在800ml水中插手186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上猛烈攪拌,用NaOH調理溶液的pH值至8.0,而后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。
溴化乙錠(10mg/ml):
在100ml水中插手1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完整消融,而后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保管于室溫。
1mol/LMgCl2:
在800ml水中消融203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。
酚:氯仿:
把酚和氯仿等體積夾雜后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾回以均衡這一夾雜物,置棕色玻璃瓶中,下面籠蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保管于4℃。
磷酸緩沖鹽溶液:
在800ml蒸餾水中消融8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調理溶液的pH值至7.4,加水定容至1升,高壓蒸汽滅菌20min。保管于室溫。
乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中插手11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸鈉(pH5.2和7.0):
在800ml水中消融408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調理pH值至5.2或用稀乙酸調理pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
1mol/LTris:
在800ml水中消融121.1gTris堿,插手濃HCl調理pH至所需值。
pHHCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
應使溶液冷至室溫前方可最初調定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
Tri緩沖鹽溶液(T):
在800ml蒸餾水中消融8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,插手0.015酚紅并用HCl調pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保管。
5mmol/LNH4Ac溶液:
秤取乙酸銨192.7g,減輕蒸水250ml混勻,減輕蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。
10mg/mlA(小牛血潔白卵白)溶液:
秤取100mg小牛血潔白卵白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱儲存備用。
10%十二烷基硫酸鈉(SDS):
在900ml水中消融100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,插手幾滴濃鹽酸調理溶液的pH值至7.2,插手水定容至1L,分裝備用。
TE
pH7.4
10mmol/LTrisCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTrisCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦稱TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
電泳緩沖液
Tris-乙酸(TAE):50×濃儲存液(每升):242gTri堿
5 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮50倍。
Tris-磷酸(TPE):10×濃儲存液(每升):108gTri堿
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮10倍。
Tris-硼酸(TBE):5×濃儲存液(每升):54gTri堿
27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
利用時再濃縮10倍。
堿性緩沖液:1×利用液(每升):5ml10mol/LaOH
2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸:5×濃儲存液(每升):15.1gTri堿
94g甘氨酸(電泳級)(pH8.3)
50ml10%SDS(電泳級)
2×SD凝膠加樣緩沖液
100mmol/LTris?HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)
4%SDS(電泳級)
0.2%溴酚藍
20%甘油
30%丙烯酰胺:
將29g丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于整體積為60ml的水中,加熱至37℃消融之,補加
水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中
保管于室溫。
10mol/L乙酸銨:
把770g乙酸銨消融于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。
1mol/LCaCl2:
在200ml純水中(Milli-Q水或相稱級別的水)消融54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份儲存于-20℃。
2.5mol/LCaCl2:
在20ml蒸餾水中消融13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份儲存于-20℃。
1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):
用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)消融3.09gDTT,過濾除菌后分裝成1ml小份儲存于-20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0):
在800ml水中插手186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上猛烈攪拌,用NaOH調理溶液的pH值至8.0,而后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。
溴化乙錠(10mg/ml):
在100ml水中插手1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完整消融,而后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保管于室溫。
1mol/LMgCl2:
在800ml水中消融203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。
酚:氯仿:
把酚和氯仿等體積夾雜后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾回以均衡這一夾雜物,置棕色玻璃瓶中,下面籠蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保管于4℃。
磷酸緩沖鹽溶液:
在800ml蒸餾水中消融8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調理溶液的pH值至7.4,加水定容至1升,高壓蒸汽滅菌20min。保管于室溫。
乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中插手11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸鈉(pH5.2和7.0):
在800ml水中消融408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調理pH值至5.2或用稀乙酸調理pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
1mol/LTris:
在800ml水中消融121.1gTris堿,插手濃HCl調理pH至所需值。
pHHCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
應使溶液冷至室溫前方可最初調定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
Tri緩沖鹽溶液(T):
在800ml蒸餾水中消融8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,插手0.015酚紅并用HCl調pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保管。
5mmol/LNH4Ac溶液:
秤取乙酸銨192.7g,減輕蒸水250ml混勻,減輕蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。
10mg/mlA(小牛血潔白卵白)溶液:
秤取100mg小牛血潔白卵白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱儲存備用。
10%十二烷基硫酸鈉(SDS):
在900ml水中消融100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,插手幾滴濃鹽酸調理溶液的pH值至7.2,插手水定容至1L,分裝備用。
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