雖然牢固對構造形狀的保留是必不可少的，但這一進程對IHC/ICC檢測也有不良影響。牢固能夠會轉變卵白的生化特征，如目標表位被袒護，或不再與一抗連系。表位的袒護能夠是由氨基酸與表位的交聯、表位四周有關肽段的交聯、表位構象的轉變或抗原靜電荷的轉變引發的。抗原修復指的是逆轉表位袒護和規復表位-抗體連系的手藝。

　　抗原修復手藝

　　抗原修復的須要取決于多個變量，包羅但不限于，目標抗原、所操縱的抗體、構造范例，和牢固方式和延續時候。多克隆抗體能辨認多個表位，是以即便不停止抗原修復，它們也比單克隆抗體更有能夠檢測到特定抗原。

　　今朝有多種手藝可規復表位的免疫反映性。簡略的方式有轉變抗體濃縮液的pH或陽離子濃度，這能夠影響抗體與表位的親和力。對局部袒護的表位，在起頭抗原修復之前能夠先嘗嘗轉變一抗的孵育前提。不過，這一步也須要抗體濃度、孵育時候和溫度的進一步優化。在會商抗體修復方式時，手藝凡是分為兩大類，卵白酶引誘的表位修復(PIER)和熱引誘的表位修復(HIER)。一旦優化好，抗原修復的影響能夠是較著的。

　　卵白酶引誘的表位修復(PIER)

　　在PIER方式中，卵白酶K、胰卵白酶和胃卵白酶等都曾勝利規復抗體與表位的連系。人們以為感化機制是切割了能夠粉飾表位的肽段。PIER的錯誤謬誤在于規復免疫反映性的勝利率低，且有能夠粉碎構造形狀和目標抗原。

　　熱引誘的表位修復(HIER)

　　HIER被以為能逆轉一些交聯，并完成表位二級或三級布局的重修。每種構造、牢固方式和待研討抗原的嘗試計劃必須顛末優化。總的來講，HIER的勝利率比PIER要高很多。HIER可操縱微波爐、高壓鍋、蒸屜、高壓滅菌鍋或水浴展開。在HIER嘗試中，微波爐是愈來愈風行的裝備。這些計劃大多加熱5分鐘，而后改換緩沖液。對一切HIER方式，在起頭IHC/ICC孵育之前必須讓玻片冷卻。HIER對時候、溫度、緩沖液和pH出格敏感，最好方式必須按照經歷肯定。

　　優化與限定

　　抗原修復能夠須要加強樣品與玻片或蓋玻片的附著。另外，此手藝對冰凍構造切片和酒精牢固切片凡是過于猛烈。對每種裝備，時候、溫度和pH必須顛末優化(如92-95 °C水浴中的5-10分鐘，絕對120 °C高壓鍋中的1-5分鐘)。為了優化抗原修復，必須展開開端研討，操縱時候、溫度和pH的各類組合。在操縱抗原修復方式時，應一直斟酌到染色假象的能夠性。嘗試該當包羅對比，以證實特異的抗體連系，由于染色常遭到嘗試中多個變量的影響。