細胞因子(cytokine)是由細胞排泄的具備生物活性的小份子卵白物資的統稱。在免疫應對進程中，細胞因子在免疫調理、炎癥應對、腫瘤轉移等心理和病理進程中起首要感化。細胞因子的檢測不只是根本免疫研討的有較手腕，同時在臨床疾病診斷、病程察看、療效鑒定及細胞因子醫治監測方面具備首要代價。

　　可是，因為細胞因子在體內的含量甚微，給細胞因子的檢測帶來困維，細胞因子的檢測還沒有在臨床診斷上普遍展開，已知今朝接納的細胞因子檢測方式均不完美，且差別的檢測方式所得的成果差別較大，給臨床診斷與醫治帶來必然的堅苦。是以，有須要領會各類檢測方式的特征及影響身分。

　　今朝，細胞因子生物學活性檢測和濃度測定方式首要有以下幾類。

　　一.生物學檢測法

　　生物學檢測又稱生物活性檢測，是按照細胞因子特定的生物活性而設想的檢測法。因為各類細胞因子具備差別的活性，比方IL-2增進淋巴細胞增殖，TNF殺傷腫瘤細胞，CSFci 激造血細胞集落構成，IFN掩護細胞免受病毒進犯，是以挑選某一細胞因子怪異的生物活性，便可對其停止檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類：

　　1.細胞增殖法

　　很多細胞因子具備細胞生 zhang 因子活性，出格是白細胞介素，如IL-2 ci激t細胞生 zhang 、IL-3 ci 激肥大細胞生 zhang 、IL-6 ci 激漿細胞生 zhang 等。操縱這一特征，現已挑選出一些對特定細胞因子起反映的細胞，并成立了只依靠于某種因子的細胞系，即依靠細胞株(簡稱依靠株)。這些依靠株在凡是環境下不能存活，只需在插手特定因子后能力增殖。比方IL-2依靠株ctll-2在不含IL-2的培育基中很快滅亡，而插手IL-2后則可右體外 zhang 期培育。在必然濃度范圍內，細胞增殖與IL-2量呈反比，是以經由過程測定細胞增殖環境(如操縱3h-tdr摻入法、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依靠株外，另有一些短時間培育的細胞，如胸腺細胞、骨髓細胞、促有絲割裂原ci 激后的淋巴母細胞等，都可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。

　　2.細胞因子引誘的產品闡發法

　　某些細胞因子可ci激特定細胞發生生物活性物資，如IL-2、IL-3引誘骨髓細胞分解胺、IL-6引誘肝細胞分解α1-抗糜卵白酶等。經由過程測定所誘生的響應產品，可反映細胞因子的活性。

　　3.靶細胞殺傷法

　　是按照某些細胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細胞而設想的檢測方式。凡是靶細胞多挑選體外zhang 期傳代的腫瘤細胞株，操縱同位素開釋法或染料染色等方式鑒定細胞的殺傷率。

　　4.細胞病變按捺法

　　病毒可形成靶細胞的毀傷，攪擾素等則可按捺病毒所致使的細胞病變，是以可操縱細胞病變按捺法檢測這類因子。

　　二、份子生物學方式

　　這是一類操縱細胞因子的基因探針檢測特定細胞因子基因抒發的手藝。今朝一切公認的細胞因子的基因均已克隆化，故能較輕易地取得某一細胞因子的cDNA探針或按照已知的核苷酸序列野生分解寡聚核苷酸探針。操縱基因探針檢測細胞因子mRNA抒發的方式多種多樣，常操縱雀斑雜交、Northern blot、逆轉錄PCR，細胞或構造原位雜交等。嘗試的關頭在于制備高品德的核酸探針和取得及格的待測物(提取的mRNA樣品或細胞/構造標本)。核酸探針是指一段用噴射性同位素或其余標記物(如生物素、地高辛等)標記并與目標基因互補的DNA 片斷或單鏈DNA、RNA。按照其來歷可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。此中cDNA探針和野生分解寡核苷酸探針經常利用于雀斑雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更合用于原位雜交。

　　核酸探針手藝的操縱已法式化，以cDNA探針為例首要包含：

　　①質粒DNA的提取;

　　②靶DNA 片斷的分手;

　　③靶DNA 片斷標記;

　　④待測樣品mrna的提取;

　　⑤標記cDNA探針看待檢樣品的雜交;

　　⑥噴射自顯影或顯色闡發。最近幾年來呈現的RT-PCR檢測特同性mRNA的方式也普遍用于細胞因子研討范疇。該法具備活絡、疾速等長處，乃至從1～10個細胞中便可檢出此中的特異mRNA。

　　三、免疫學檢測法

　　細胞因子均為卵白或多肽，具備較強的抗原性。跟著重組細胞因子的呈現，可較便利地取得細胞因子的特同性抗血清或單克隆抗體，是以可操縱抗原抗體特同性反映的特征，用免疫學手藝定量檢測細胞因子。雖然細胞因子品種單一，只需取得了針對某一因子的特同性抗體(包含多克隆抗體或單克隆抗體)都可接納類似的手藝展開任務。經常利用的方式包含ELISA、RIA及免疫印跡法。今朝，幾近一切罕見細胞因子的檢測試劑盒均有商品供給。另外還可操縱酶標或熒光標記的抗細胞因子單克隆抗體，原位檢測因子在細胞內的分解及散布環境，如邇來來成長起來的細胞內染色法和酶聯免疫雀斑(ELISPOT)手藝等。免疫學檢測法可間接測定樣品中特定細胞因子的含量(用ng/ml表現)，為大范圍檢測臨床病人血清中細胞因子的含量供給了便利。本法僅測定細胞因子的抗原性，與該因子活性不必然相平行，是以要領會細胞因子的生物學效應，必須連系生物學檢測法。

　　上述三種方式，各有優錯誤謬誤，可相互填補，在現實操縱中，可按照各自的嘗試目標和嘗試室前提停止挑選。生物學檢測法比擬敏感，又可間接測定生物學功效，是最靠得住的方式，合用于各類嘗試目標，是科研部分最經常利用的手藝，但須要持久培育依靠性細胞株，檢測耗時長，步驟復雜，影響身分多，不輕易諳練把握。免疫學檢測法比擬簡略，敏捷，反復性好，但所測定的只代表響應細胞因子的量而不代表活性，同時敏感度也低于生物活性檢測法(約低10～100倍)。份子生物學法只能檢測基因抒發環境，不能間接供給有關因子的濃度及活性等材料，首要用于機制切磋。在檢測細胞因子時，必須斟酌到細胞因子的感化具備收集性的特色，人們需明白檢測方式所測定的細胞因子成份，并斟酌其按捺劑和可溶性受體的程度，將各類連系操縱，有能夠取得較為靠得住的成果。