緊密稱取大黃酸對比品0.00402g，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，制得對比品儲蓄液，取儲蓄液適當，加活動相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對比品系列溶液，各依法進樣20μl，按上述色譜前提停止測定。

1色譜前提

在前提VertexC18液相色譜柱（150×4.6mm,5μm），活動相為甲醇-0.1%磷酸溶液85：15，檢測波長為254nm，流速為1ml·min-1。溫度：室溫20℃下，12min是大黃酸的保留時候約，與別的峰分隔。

2儀器和試劑

LC-10T高效相色譜儀,VI2010S色譜數據處置軟件。甲醇（色譜純），重蒸餾水，別的試劑為闡發純。由中國藥品生物成品檢定所供給的大黃酸對比品。樣品常通口服液為南邊病院藥學部試制。

3線性干系考查

緊密稱取大黃酸對比品0.00402g，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，制得對比品儲蓄液，取儲蓄液適當，加活動相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對比品系列溶液，各依法進樣20μl，按上述色譜前提停止測定。以大黃酸對比品濃度X為縱坐標，峰面積Y（μg）為橫坐標，繪制規范曲線。線性回歸方程為：Y=9.534×10-6X0.1934,相干系數r=1.0000。申明進樣量在0.0402-0.804μg規模內,對比品濃度與峰面積呈線性干系。

3對比品溶液與供試品溶液的制備

對比品溶液的制備：緊密移取大黃酸對比品儲蓄液適當，加活動相濃縮為濃度為8.04μg/ml對比品溶液。

供試品溶液的制備：緊密移取常通口服液10ml，插手1ml0.8%的磷酸溶液，插手甲醇定容至20ml，搖勻，離心10min，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即為供試品溶液。

空缺溶液的制備：取除大黃的藥味按同一工藝制成的缺大黃空缺樣品0.2ml，按供試品溶液制備方式操縱，即得。

4緊密度嘗試

緊密吸收8.04μg/ml的對比品溶液10μl，注入高效液相色譜儀,持續測定5次，大黃酸的均勻峰面積為831543,RSD=0.18%（n=5）。標明成果緊密度杰出。

5不變性嘗試

緊密吸收室溫保管的同一對比品溶液10μl,同法每距離必然時候進樣測定,共5次,成果標明供試品溶液在7天內無較著變更，標明此對比品根基不變,RSD=0.49%.

6反復性嘗試

取同一批常通口服液6份各10ml,依法測定,成果大黃酸含量的均勻值為165.62,RSD=2.15%（n=6）。申明方式反復性較好.