微生物具備輕易變異的特征，是以，在收藏進程中，必須使微生物的代謝處于最不活潑或絕對運動的狀況，才能在必然的時候內使其不發生變異而又堅持糊口才能。

　　高溫、枯燥和隔斷氛圍是使微生物代謝才能降落的主要身分，以是，菌種收藏方式雖多，但都是按照這三個身分而設想的。

　　一、收藏方式大抵可分為以下幾種：

　　1.傳代培育收藏法

　　又有斜面培育、穿刺培育、皰肉培育基培育等(后者作收藏厭氧細菌用)，培育后于4—6℃冰箱內保管。

　　2.液體白臘籠蓋收藏法

　　是傳代培育的變相方式，可以或許恰當耽誤收藏時候，它是在斜面培育物和穿刺培育物上面籠蓋滅菌的液體白臘，一方面可避免因培育基水份蒸發而引發菌種滅亡，另外一方面可禁止氧氣進入，以削弱代謝感化。

　　3.載體收藏法

　　是將微生物吸附在恰當的載體，如泥土、沙子、硅膠、濾紙上，爾后停止枯燥的收藏法，比方沙土收藏法和濾紙收藏法操縱相稱普遍。

　　4.寄主收藏法

　　用于今朝尚不能在野生培育基上發展的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在糊口的植物、蟲豸、雞胚內傳染并傳代，此法相稱于普通微生物的傳代培育收藏法。病毒等微生物亦可用其余方式如液氮收藏法與冷凍枯燥收藏法停止收藏。

　　5.冷凍收藏法

　　可分高溫冰箱(-20—-30℃，-50—-80℃)、干冰酒精疾速解凍(約-70℃)和液氮(-196℃)等收藏法。

　　6.冷凍枯燥收藏法

　　先使微生物在極高溫度(-70℃擺布)下疾速冷凍，爾后在減壓下操縱升華景象撤除水份(真空枯燥)。

　　有些方式如濾紙收藏法、液氮收藏法和冷凍枯燥收藏法等均需利用掩護劑來制備細胞懸液，以避免因冷凍或水份不時升華對細胞的侵害。掩護性溶質可經由過程氫和離子鍵對水和細胞所發生的親和力來穩定細胞成份的構型。掩護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。

　　二、東西:　　細菌、酵母菌，放線菌和霉菌;

　　肉膏卵白胨斜面培育基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學純的液體白臘，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣;

　　滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培育皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管(長頸球形底)，40目與 100目篩子，油紙，濾紙條(0.5×1.2cm)，枯燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，高溫冰箱(-30℃)，液氮冷凍收藏器。

　　三、操縱步驟、各收藏法的操縱規模及優錯誤謬誤

　　以下各法可按照嘗試室詳細前提與須要選做。

　　1.斜面高溫收藏法

　　將菌種接種在適合的固體斜面培育基上，待菌充實發展后，棉塞局部用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中收藏。

　　收藏時候依微生物的品種而有差別，霉菌、放線菌及有芽孢的細菌保管2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每個月移種一次。

　　此法為嘗試室和工場菌種室常常利用的收藏法，長處是操縱簡略，利用便利，不需出格裝備，能隨時查抄所收藏的菌株是不是滅亡、變異與凈化雜菌等。錯誤謬誤是輕易變異，由于培育基的物理、化學特征不是嚴酷恒定的，多次傳代會使微生物的代謝轉變，而影響微生物的性狀;凈化雜菌的機遇亦較多。

　　2.液體白臘收藏法

　　(1)將液體白臘分裝于三角燒瓶內，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘，爾后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發掉，備用。

　　(2)將須要收藏的菌種，在最適合的斜面培育基中培育，使得到硬朗的菌體或孢子。

　　(3)用滅菌吸管吸收滅菌的液體白臘，注入已長好菌的斜面上，其用量以超出跨越斜面頂端1cm為準(圖Ⅶ-12)，使菌種與氛圍隔斷。

　　(4)將試管豎立，置高溫或室溫下保管(有的微生物在室溫下比冰箱中保管的時候還要長)。

　　此法合用而結果好。霉菌、放線菌、芽孢細菌可收藏2年以上不死，酵母菌可收藏1—2年，普通無芽孢細菌也可收藏1年擺布，乃至用普通方式很難收藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可收藏3個月之久。此法的長處是建造簡略，不需出格裝備，且不需常常移種。錯誤謬誤是保管時必須豎立安排，所占地位較大，同時也不便攜帶。從液體白臘上面取培育物移種后，接種環在火焰上炙烤時，培育物輕易與殘留的液體白臘一路飛濺，應出格注重。

　　3.濾紙收藏法

　　(1)將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘。

　　(2)將須要保管的菌種，在適合的斜面培育基上培育，使充實發展。

　　(3)取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培育皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。

　　(4)用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

　　(5)將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的枯燥器中，用真空泵抽氣至干。

　　(6)將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保管于高溫下。

　　(7)須要利用菌種，新生培育時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃分裂，再用鑷子敲掉口真個玻璃，待安瓿管開啟后，掏出濾紙，放入液體培育基內，置溫箱中培育。

　　細菌、酵母菌、絲狀真菌都可用此法收藏，前二者可收藏2年擺布，有些絲狀真菌乃至可收藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍枯燥法簡潔，不須要出格裝備。

　　4.沙土收藏法

　　(1)取河沙插手10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除此中的無機質。

　　(2)倒去酸水，用自來水沖刷至中性。

　　(3)烘干，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。

　　(4)另取非耕耘層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗濯數次，直至中性。

　　(5)烘干，碾碎，經由過程100目篩子過篩，以去除粗顆粒。

　　(6)按一份黃土、三份沙的比例(或按照須要而用其余比例，乃至可全數用沙或全數用土)摻合平均，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g擺布，塞上棉塞，停止滅菌，烘干。

　　(7)抽樣停止無菌查抄，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培育基中，37℃培育48小時，若仍有雜菌，則需全數從頭滅菌，再作無菌嘗試，直至證實無菌，方可備用。

　　(8)挑選培育成熟的(普通指孢子層發展飽滿的，養分細胞用此法結果不好)杰出菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。

　　(9)于每支沙土管中插手約0.5ml(普通以方才使沙土潤濕為好)孢子懸液，以接種針拌勻。

　　(10)放入真空枯燥器內，用真空泵抽干水份，抽干時候越短越好，務使在12小時內抽干。

　　(11)每10支抽取一支，用接種環掏出多數沙粒，接種于斜面培育基上，停止培育，察看發展環境和有不雜菌發展，如呈現雜菌或菌落數很少或底子不長，則申明建造的沙土管有題目，尚須進一步抽樣查抄。

　　(12)若經查抄不題目，用火焰熔封管口，放冰箱或室內枯燥處保管。每半年查抄一次活氣和雜菌環境。

　　(13)須要利用菌種，新生培育時，取沙土少量移入液體培育基內，置溫箱中培育。

　　此法多用于能發生孢子的微生物如霉菌、放線菌，是以在抗生素產業出產中操縱最廣，結果亦好，可保管2年擺布，但操縱于養分細胞結果不佳。

　　5.液氮冷凍收藏法

　　(1)籌辦安瓿管用于液氮收藏的安瓿管，請求本事受溫度俄然變更而不致分裂，是以，須要接納硼硅酸鹽玻璃建造的安瓿管，安瓿管的巨細凡是利用75×10mm的，或能容1.2mm液體的。

　　(2)加掩護劑與滅菌保管細菌、酵母菌或霉菌孢子等輕易分離的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌15分鐘：若作保管霉菌菌絲體用則需在安瓿管內事后插手掩護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液，插手量以能淹沒今后插手的菌落圓塊為限，爾后再用1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌15分鐘。

　　(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有掩護劑的安瓿管內，爾后用火焰熔封。浸入水中查抄有不縫隙。

　　(4)解凍再將已封口的安瓿管以每分鐘降落1℃的慢速解凍至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會構成冰的結晶，因此降落存活率。

　　(5)收藏經解凍至-30℃的安瓿管當即放入液氮冷凍收藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內，爾后再將小圓筒放入液氮收藏器內。液氮收藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。

　　(6)規復培育收藏的菌種須要用時，將安瓿管掏出，當即放入38—40℃的水浴中停止急劇解凍，直到全數融化為止。再翻開安瓿管，將內容物移入適合的培育基上培育。

　　此法除適合于普通微生物的收藏外，對一些用冷凍枯燥法都難以保管的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以構成孢子的霉菌、噬菌體及植物細胞都可持久收藏，并且性狀穩定異。錯誤謬誤是須要出格裝備。

　　6.冷凍枯燥收藏法

　　(1)籌辦安瓿管用于冷凍枯燥菌種收藏的安瓿管宜接納中性玻璃建造，外形可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15)，巨細請求外徑6—7.5mm，長105mm，球部直徑9—11mm，壁厚0.6—1.2mm。也可用不球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘，備用。

　　(2)籌辦菌種，用冷凍枯燥法收藏的菌種，其收藏期可達數年至十數年，為了在很多年后不出過失，故所用菌種要出格注重其純度，即不能有雜菌凈化，爾后在最適培育基頂用最適溫度培育，使培育出杰出的培育物。細菌和酵母的菌齡請求跨越對數發展期，若用對數發展期的菌種停止收藏，其存活率反而降落。普通，細菌請求24—48小時的培育物;酵母需培育3天;構成孢子的微生物則宜保管孢子;放線菌與絲狀真菌則培育7—10天。

　　(3)制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml擺布插手斜口試管中，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0.2ml。

　　(4)冷凍冷凍枯燥器有成套的裝配出賣，代價高貴，此處先容的是簡略單純方式與裝配，可到達一樣的目標。

　　將分裝好的安瓿管放高溫冰箱中冷凍，無高溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精液或干冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管拔出冷凍劑，只要冷凍4—5分鐘，便可使懸液結冰。

　　(5)真空枯燥為在真空枯燥時使樣品堅持解凍狀況，需籌辦冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，夾雜平均，可冷至-15℃。裝配儀器如圖Ⅶ-16，安瓿管放入冷凍槽中的枯燥瓶內。

　　抽氣普通若在30分鐘內能到達93.3Pa(0.7mmHg)真空度時，則枯燥物不致融化，今后再持續抽氣，幾小時內，肉眼可察看到被枯燥物已趨枯燥，普通抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg)，堅持壓力6—8小時便可。

　　(6)封口抽真空枯燥后，掏出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管(圖Ⅶ-17)持續抽氣，約10分鐘便可到達26.7Pa(0.2mmHg)。于真空狀況下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中間停止封口。封口今后，保管于冰箱或室溫暗處。

　　此法為菌種收藏方式中最有用的方式之一，對普通糊口力強的微生物及其孢子和無芽胞菌都合用，即便對一些很難保管的致病菌，如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保管。合用于菌種持久保管，普通可保管數年至十余年，但裝備和操縱都比擬龐雜。