1、將規范品和樣品對應的微孔編號，每一個規范品和樣品做雙孔平行，并記實規范品和樣品的地位。

　　2、在規范品孔中插手50l各規范品溶液，酶標儀在百般品孔中插手50l樣品溶液。

　　3、在一切孔中插手50l的抗體任務液，用蓋板膜封板，悄悄振蕩混勻，25℃環境中避光反映30分鐘。

　　4、謹慎揭開蓋板膜，甩干孔中液體，用濃縮好的洗濯液（250μl/孔）充實洗濯微孔板3次，在吸水紙上拍干（拍干后未斷根的氣泡可用未利用過的槍頭戳破）。

　　5、酶標儀在一切孔中插手100l的酶標二抗，酶標儀用蓋板膜封板，悄悄振蕩混勻，25℃環境中避光反映30分鐘。掏出酶標板，按步驟4洗板5次。

　　6、洗濯法式實現后，當即用微量移液器在每一個微孔中先插手50l底物液A，再加50l底物液B，輕細晃悠反映板使之完全混勻，25℃環境避鮮明色15分鐘(在色彩淺的環境下可恰當耽誤反映時候，但總顯色時候不要跨越30分鐘)。

　　7、每孔中插手50l停止液，悄悄晃悠使之完全混勻，在450nm（倡議利用雙波長450/630nm）下檢測吸光度，成果在5分鐘內讀取。