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分光光度法測定葉綠素含量

[2015/11/9]

  一、嘗試目標
  1.領會動物構造中葉綠素的散布及性子。
  2.把握測定葉綠素含量的道理和方式。

  二、嘗試道理
  葉綠素普遍存在于果蔬等綠色動物構造中,并在動物細胞中與卵白質結分解葉綠體。當動物細胞滅亡后,葉綠素即游離出來,游離葉綠素很不不變,對光、熱較敏感;在酸性前提下葉綠素天生綠褐色的脫鎂葉綠素,在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽和葉綠醇和甲醇。高檔動物中葉綠素有兩種:葉綠素b,二者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

  葉綠素的含量測定方式有多種,此中首要有:
  1.原子接收光譜法:經由過程測定鎂元素的含量,進而直接計較葉綠素的含量。
  2.分光光度法:操縱分光光度計測定葉綠素提取液在最大接收波長下的吸光值,便可用朗伯—比爾定律計較出提取液中各色素的含量。
  葉綠素a和葉綠素b645nm663nm處有最大接收,且兩接收曲線訂交于652nm處。是以測定提取液在645nm663nm652nm波長下的吸光值,并根據經歷公式可別離計較出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的含量。

  三、儀器、質料和試劑
  儀器:分光光度計、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管。
  質料:新穎(或烘干)的動物葉片
  試劑:1.96%乙醇(80%丙酮)2. 石英砂;3. 碳酸鈣粉

  四、操縱步驟
  取新穎動物葉片(或別的綠色構造)或干資料,擦凈構造外表污物,去除中脈剪碎。稱取剪碎的新穎樣品2g,放入研缽中,加少許石英砂和碳酸鈣粉及3mL95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10mL,持續研磨至構造變白。靜置35min
  取濾紙1張置于漏斗中,用乙醇潮濕,沿玻棒把提取液倒入漏斗,濾液流至100mL 棕色容量瓶中;用少許乙醇沖刷研缽、研棒及殘渣數次,最初連同殘渣一路倒入漏斗中。
  用滴管吸收乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全數洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最初用乙醇定容至100mL,搖勻。
  取葉綠體色素提取液在波長665nm645nm652nm下測定吸光度,以95%乙醇為空缺對比。

  五、計較
  根據嘗試道理中供給的經歷公式,別離計較動物資料中葉綠素ab和總葉綠素的含量。