【嘗試道理】
一個基因抒發最終成果是發生響應的卵白質（或酶）。是以檢測卵白質是測定基因抒發的首要標記，檢測卵白質的方式良多，除ELISA法外，也可用與檢測DNA和RNA相近似的吸印方式。前兩法有“南"和“北"之意，故本法遂被延長稱為Western（西）印跡法，該法能用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分辯出與專注抗血清連系的專注性卵白質。將聚丙烯酰胺凝膠上分辯出的卵白質轉移到硝酸纖維素膜上并與第一抗體共孵。第一抗體專注地與待分手蛋自質的抗原決議簇連系，而后用另外一種蛋自質，如135I-卵白A或辣根過氧化物酶毗連的山羊抗IgG檢測已連系上去的抗體。本法所需時候6小時。

卵白質的聚丙烯酰胺凝膠電泳：
幾近一切卵白質電泳闡發都在聚丙烯酰胺凝膠長停止，而所用前提總要確保卵白質解離成單個多肽亞基并盡能夠削減其彼此間的堆積。最經常利用的方式是將強陰離子去污劑SDS與某一復原劑并用，并經由過程加熱使卵白質解離后再加樣于電泳凝膠上。變性的多肽與SDS連系并是以而帶負電荷，由于多肽連系SDS的量幾近老是與多肽的份子量成反比而與其序列有關，是以 SDS多肽復合物在聚丙烯酰凝膠電泳中的遷徙只與多肽的巨細相干。在達到飽和的狀況下，每克多肽約可連系1.4克去污劑，借助已知份子量的規范參照物，則可測算出多肽鏈的份子量。
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳大多在不持續緩沖體系中停止，其電泳槽緩沖液的pH值與離子強度差別于配膠緩沖液，當兩電極直接通電流后，凝膠中構成挪動界面，并動員插手凝膠的樣品中所含的SDS多肽復合物向前鞭策。樣品經由過程高度多孔性的積層膠后，復合物在分手膠外表堆積成一條很薄的區帶（或稱積層）。曲于不持續緩沖體系具備把樣品中的復合物全數濃縮于極小體積的才能，故大大進步了SDS聚丙烯酰胺凝膠的分辯率。
最廣泛利用的不持續緩沖體系最早是由Ornsstein（1964）和Davis（1964）設想的，樣品和積層膠中含Tris-Cl（pH6.8），高低槽緩 沖液含Tris-甘氨酸（pH8.3），分手膠中含Tris-Cl（pH8.8）的。體系中一切組分都含有0.1％的SDS（Laemmli, 1970），樣品和積層膠中的氯離干構成挪動界面的先導邊境而甘氨酸份子則構成跟隨邊境，在挪動界面的雙方境之間是一電導較低而電位滴度較陡的地區，它鞭策樣品中的多肽前移并在分手膠前沿儲蓄積累，此處pH值較高，有益于甘氨酸的離子化，所構成的甘氨酸離子穿過積累的多肽并緊隨氯離子以后，沿分手膠泳動。從挪動界面中擺脫后，SDS多肽復合物成一電位和pH值平均的區帶泳動穿過分手膠，并被篩分而依各自的巨細獲得分手。

【經常利用試劑】
1）30%丙烯酰胺/0.8% N,N’-亞甲丙烯酰胺
將30克丙烯酰胺和0.8克N,N’-亞甲丙烯酰胺溶于整體積為60ml的水中，加熱至37℃消融之，補加水至終體積為100ml。0.45µm微孔濾膜過濾除菌，查證該溶液pH應不大于7.0，置棕色瓶中保管。
謹嚴：丙烯酰胺具備很強的神經毒性并可經由過程皮膚接收，其感化具備積累性。稱量丙烯酰胺和N,N’-亞甲丙烯酰胺時應戴手套和面具。能夠為聚丙烯酰胺無毒，但也應謹嚴操縱，由于它還能夠含有少許未聚合資料。

2）4×TrisCl/SDS, pH8.8,
在300mlH2O中消融91g Tris堿（1.5mol/L），用1mol/L調理pH至8.8, 補加H2O至體積500ml。用0.45um濾膜過濾溶液，再插手2g SDS[0.4%（w/v）]，于4℃可保管1月。

3）4×TrisCl/SDS, pH6.8,
在40mlH2O中消融6.05g Tris堿（0.5mol/L），用1mol/L調理pH至6.8, 補加H2O至體積100ml。用0.45um濾膜過濾溶液，再插手0.4g SDS[0.4%（w/v）]，于4℃可保管1月。

4）4×SDS電泳緩沖液
Tris base 24.2 g
Glycerin 115.3 g
20%SDS 20 ml
加水至整體積1000ml。
利用時濃縮4倍即為1×SDS電泳緩沖液（Tris 0.05M, Glycerin 0.38M, SDS 0.1%）。

5）TEMED （N,N,N’,N’-四甲基乙二胺）
TEMED經由過程催化過硫酸銨構成自在基而加快丙烯酰胺和N,N’-亞甲丙烯酰胺的聚合。

6）10%過硫酸銨
過硫酸銨供給驅動丙烯酰胺和亞甲丙烯酰胺聚合所必需的自在基。可用去離子水配制小量10%（w/v）的儲存液并保管于4℃。由于過硫酸銨會遲緩分化，故應隔周新穎配制。

【操控進行】

1）按廠商的利用指南用兩塊清潔的玻璃，平板和0.75mm墊片組裝電泳裝配中的玻璃平板夾層，并牢固在灌膠支架上。
2）按表1配制分手膠液體并脫氣，而后插手10％的過硫酸銨和TEMED，悄悄攪拌混勻。
表1 聚丙烯酰胺分手膠的配制
試劑成份派制差別濃度分手膠所需試劑（ml）
　　　　　5%　　　　　8%　　　　　10%　　　　　12%　　　　　15%
Acry:Bis(30:0.8)2.50　　4.00　　　　　5.00　　　　　6.00　　　　　7.50
4×Tris?Cl/SDS, pH8.8　3.75　　　　　3.75　　　　　3.75　　　　　3.75
H2O　　　8.75　　　　7.25　　　　　6.25　　　　　5.25　　　　　3.25
10%過硫酸銨0.05　　　0.05　　　　　0.05　　　　　0.05　　　　　0.05
TEMED　0.01　　　　　0.01　　　　　0.01　　　　　0.01　　　　　0.01
按所需分手的卵白質份子巨細挑選適合的丙烯酰胺百分比濃度，普通地，5％的凝膠可用于60～200kDa的SDS變性卵白質份子的分手，10％用于16～70kDa，15％用于12～45kDa。
3）用一根巴斯德吸管立行將分手膠液體沿夾層中一條墊片的邊緣插手于玻璃平板夾層中，至凝膠約5cm高為止。樣品體積少于10μl不需灌制積層膠。
4）用另外一根已斯德吸管，先從一邊的墊片，再從另外一邊墊片往夾層的液面頂部徐徐插手一層水飽和異丁醇（厚約1cm）。讓凝膠在室溫聚合30min。
聚合后，可見在頂層異丁醇與凝膠的界面間有一清楚的折光芒，膠的聚合失利常常題目在于過硫酸按或TEMED，或二者都有。
5）傾去頂層的異丁醇，并以1×Tris-Cl/SDS, pH8.8緩沖液沖刷凝膠的頂部外表,盡可能用吸水紙吸干。
6）按表2配制積層膠液體，用吸管將液體沿一條墊片插手到玻璃平板夾層，直至夾層的頂部。
GEL%（3.9%）　　Total（10.05ml）
Acry:Bis（30:0.8）　　　　1.30 ml
4×TrisCl/SDS　　　pH6.8 2.50 ml
H2O 6.10 ml
10%過硫酸銨0.05 ml
TEMED 0.01 ml
7）將0.75mm厚的梳子拔出夾層的積層膠液體中，須要時，再補加積層膠液體豐裕殘剩空間。讓積層膠室溫聚合30min。
8） 在具螺口蓋的微量離心管中，用2×SDS加樣緩沖液按1:1（v/v）濃縮待測卵白質樣品，于100℃煮沸5-10min。如樣品是卵白質積淀物，插手 50～100µl 1×SDS加樣緩沖液消融之，并一樣在100℃煮沸5-10min。按供給商的利用指南用2×SDS加樣緩沖液消融卵白質份子量規范夾雜物。
對 0.3cm寬的加樣孔，保舉加樣體積以不跨越20µl為好。用考馬斯亮藍染色法顯跡，成份很龐雜的卵白質夾雜物需加25～50µg，而樣品中只要一種或未幾的幾種卵白的話，只要1～10µg卵白量。接納銀染顯跡時，樣品用量可減小10～100倍（按樣品的龐雜水平在小于20µl的體積溶有0.01～0.5ng卵白樣品不等）。
2×SDS加樣緩沖液（loading buffer）配制：
　成份　　　　　　　　體積（ml）
0.5MTrisCl（pH6.8）　　12.5
20%SDS 　　　　　　　11.5
Glycerin　　　　　　　　10
2% Blue-Bromo-phenol　　2.5
β-mercaptoethanol　　　5.0
加H2O至整體積50 ml，分裝
β-mercaptoethanol 在臨用前插手。
9）謹嚴拔出梳子，防止扯破聚丙烯酰胺凝膠加樣孔。掏出梳子后，以1×SDS電泳電泳緩沖液沖刷加祥孔，并以此緩沖液布滿之。
10）按廠商指南將凝膠板牢固到電泳裝配的上緩沖液室（上槽），同時往下緩沖液室（下槽）插手保舉量的1×SDS電泳緩沖液。
11）將牢固于上槽的凝膠板放入下槽中，并往上槽插手局部電泳緩沖液至恰好覆沒凝膠的加樣孔。
12）用帶平嘴針頭的50µl打針器將一樣濃度的卵白質樣品等體積插手到樣品孔中，謹嚴加樣使樣品在孔的底部成一薄層，對比孔插手卵白質份子量規范樣品，若有空置的加樣孔，須加等體積的空缺1×SDS樣品緩沖液，以防相鄰泳道樣品的分散。
13）再往上槽插手余下的1×SDS電泳緩沖液。此操縱遲緩謹嚴，以防沖起樣品孔中的樣品。
14）毗連電源，對0.75mm厚的垂直板電泳，先在60V下電泳至溴酚藍染料從積層膠進入分手膠，再將電壓調至120V持續電泳至溴酚藍達到凝膠底部為止。
15）封鎖電源并撤去毗連的導線，棄去電泳緩沖液。連同上槽一路將凝膠夾層掏出。
16）將凝膠定位以便辨認加樣的挨次，將凝膠板從上槽解離出來，放在一疊吸水紙或紙巾上。
17）謹嚴將封邊的墊片抽出一半，并以此為杠桿橇起上面的玻璃平板，使凝膠裸露出來。
18）謹嚴從上面的玻璃平板上移出凝膠，在凝膠的一角切去一小塊以便在染色及干膠后仍能認出加樣順序，接著便可停止卵白質的檢測。
19）轉膜：將凝膠面與負極相連，硝酸纖維素膜與正極相連。（100V，1小時）要放于4℃。
20）洗濯：將硝酸纖維素膜放入1X TBST中洗濯3次，每次5分鐘。搖床動搖。
21）封鎖
22）一抗孵育：一抗用TBST1:1000濃縮，將硝酸纖維素膜放入此中，37℃孵育1.5小時，搖床動搖。
23）洗濯：將硝酸纖維素膜放入1X TBST中洗濯3次，每次5分鐘。
24）二抗孵育：二抗用TBST1:8000濃縮，將硝酸纖維素膜放入此中，37℃孵育1小時，搖床動搖。
25）洗濯：同22，以后，用1X TBS在洗濯2次，每次5分鐘，以洗去膜上的Tween 20，由于它能夠障礙底物的堆積。
26）顯色
按以下配方配制顯色液：
1mL水+1滴（約莫50微升）試劑A（以后混勻）+1滴試劑B+1滴試劑C。
將鹽酸棉甲基纖維素膜加進此中孵育，己經顯色，及時加進去鋁離子泥中變慢揭示。