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卵白質的定量測定嘗試
[2015/1/16]
卵白質定量是生歸天學、食物查驗和別的性命學科最常觸及的闡發內容,是臨床診斷的主要目標,也是良多生物成品、藥物、食物品德檢測的主要目標。生化嘗試中,在對生化藥品,出格是卵白質、酶、某些多肽或卵白質激素的分手純化時,對卵白質停止切確靠得住的定量闡發長短常主要的。
可是卵白質的品種良多,布局不均一,份子量又相差很大,功效各別,這給成立一個抱負而又通用的卵白質定量闡發的方式帶來了很大的堅苦。今朝測定卵白質含量的方式有良多種,差別的方式各有其特色。
紫外分光光度法是按照卵白質的物感性子來對卵白質停止定量的;而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試按照卵白質的化學性子來完成對卵白質停止定量的;按照卵白質的染色性子的差別,又成立了考馬氏亮藍染色法和銀染法;另外另有人在這些卵白質定量方式的根本上成立了熒光法。
因為每種方式都有其本身的特色和規模性,是以須要在領會各類方式的根本上按照差別環境選用得當的卵白質測定方式,以知足差別的請求。比方凱氏定氮法成果最切確,但操縱龐雜,用于多量量樣品的測試則不太及格;雙縮脲法操縱簡略,線性干系好,但活絡度差,樣品須要量大,丈量規模窄,是以在科研上的利用遭到限定;而酚試劑法填補了它的錯誤謬誤,它連系了雙縮脲法中銅鹽反映與Folin-ciocalteau試劑反映的特色,是以在科研中被普遍接納,可是它的攪擾身分較多;考馬氏亮蘭染色法因其活絡而簡潔起頭從頭遭到存眷;BCA法以其試劑不變,抗攪擾才能較強,成果不變,活絡度高而遭到接待;而膠體金法具備較高的活絡度,可達到毫微克程度,用于微量卵白的測定。
可是卵白質的品種良多,布局不均一,份子量又相差很大,功效各別,這給成立一個抱負而又通用的卵白質定量闡發的方式帶來了很大的堅苦。今朝測定卵白質含量的方式有良多種,差別的方式各有其特色。
紫外分光光度法是按照卵白質的物感性子來對卵白質停止定量的;而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試按照卵白質的化學性子來完成對卵白質停止定量的;按照卵白質的染色性子的差別,又成立了考馬氏亮藍染色法和銀染法;另外另有人在這些卵白質定量方式的根本上成立了熒光法。
因為每種方式都有其本身的特色和規模性,是以須要在領會各類方式的根本上按照差別環境選用得當的卵白質測定方式,以知足差別的請求。比方凱氏定氮法成果最切確,但操縱龐雜,用于多量量樣品的測試則不太及格;雙縮脲法操縱簡略,線性干系好,但活絡度差,樣品須要量大,丈量規模窄,是以在科研上的利用遭到限定;而酚試劑法填補了它的錯誤謬誤,它連系了雙縮脲法中銅鹽反映與Folin-ciocalteau試劑反映的特色,是以在科研中被普遍接納,可是它的攪擾身分較多;考馬氏亮蘭染色法因其活絡而簡潔起頭從頭遭到存眷;BCA法以其試劑不變,抗攪擾才能較強,成果不變,活絡度高而遭到接待;而膠體金法具備較高的活絡度,可達到毫微克程度,用于微量卵白的測定。
附:經常使用的測定卵白質含量方式的比擬
|
方 法 |
測定規模
(μg/ml) |
差別品種
卵白的差別 |
最大接收
波長(nm) |
特 點 |
|
凱氏定氮法 |
|
小 |
|
規范方式,切確,操縱費事,費時,活絡度低,合用于規范的測定 |
|
紫外分光光度法 |
100—1000 |
大 |
280 205 |
活絡,疾速,不耗損樣品,核酸類物資有影響
|
|
雙縮脲法 |
1000—10000 |
小 |
540 |
反復性、線性干系好,活絡度低,測定規模窄,樣品須要量大 |
|
Folin-酚試劑法 |
20—500 |
大 |
750 |
活絡,費時較長,攪擾物資多 |
|
考馬氏亮藍G-250 |
50—500 |
大 |
595 |
活絡度高,不變,偏差較大,色彩會轉移 |
|
BCA |
50—500 |
大 |
562 |
活絡度高,不變,攪擾身分少,費時較長 |
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