緊密稱取供試品適當(相稱于維生素 D 總量 600 單元以上，分量不跨越 2.0g)，置皂化瓶中，加乙醇 30ml、抗壞血酸 0.2g 與 50%(g/g)氫氧化鉀溶液 3ml[若供試量為 3g，則加 50%(g/g)氫氧化鉀溶液 4ml]，置水浴上加熱回流 30 分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水 10ml 沖刷冷凝管內壁，將皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水 60～100ml 分數次洗濯，洗液并入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚

　　振搖提取 3 次，第一次 60ml，今后每次 40ml，歸并乙醚液，用水洗濯數次，每次約 100ml，洗濯時應徐徐旋動，防止乳化，直至水層遇酚酞唆使液不再顯白色，靜置，分取乙醚提取液，插手枯燥濾紙條少許振搖撤除乙醚提取液中殘留的水份，分液漏斗及濾紙條再用少許乙醚洗濯，洗液與提取液歸并，置具塞圓底燒瓶中，在水浴上高溫蒸發至約 5ml，再用氮氣流吹干，敏捷緊密插手甲醇 3ml，密塞，超聲處置助溶后，移入離心管中，離心，取上清液作為供試品溶液 A。

　　污染用色譜柱體系分手搜集維生素 D 緊密量取上述供試品溶液 A 500ml，注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑的液相色譜柱，以甲醇-乙腈-水(50:50:2)為活動相停止分手，檢測波長為 254nm，從計錄儀上察看色譜圖，請求維生素 D 與前維生素 D 為疊峰，并能與維生素 A 及其余攪擾含量測定的雜質分隔;精確 搜集含有維生素 D 及前維生素 D 夾雜物的全數流出液，置具塞圓底燒瓶中，用氮氣流敏捷吹干,緊密插手正己烷溶液適當使每 1ml 中含維生素 D 為 50～140 單元，密塞，超聲處置助溶，即為供試品溶液 B。取供試品溶液 B，按第一法停止含量測定，進樣量為 100～200ml。