1.細胞：選對數發展期細胞，搜集細胞24小時前換液一次。

　　2.計數：按慣例方式把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。

　　3.凍存液：先用培育液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，而后用吸管悄悄奏樂令細胞重懸。

　　4.分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。

　　5.封口：用塑料安剖時擰緊瓶口便可;如用火焰封鎖安剖口后，細心查抄，定要封嚴，須要時可浸入藍色液中察看，為寧靜起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱產生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩，結尾扎有小牌，說明：細胞稱號，凍存日期，以便往后查找。