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液相色譜柱的利用注重事變及再生

[2014/8/8]
  1 、色譜柱的利用申明:

  ( 1 )、 色譜柱利用前注重事變:

  色譜柱的貯存液無特別申明,均為評估報告所示的活動相。在利用前,必然要注重色譜柱的貯存液與要闡發樣品的活動相是不是互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用 10 %擺布的低濃度的無機相洗脫劑過渡一下,不然緩沖液中的鹽在高濃度的無機相中很輕易析出,梗塞色譜柱。

  ( 2 )、 活動相:

  活動相中所利用的各類無機溶劑要盡能夠利用色譜純,配活動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。若是將所配得活動相再顛末 0.45μm 的濾膜過濾一次則更好,特別是含鹽的活動相。別的,裝活動相的容器和色譜體系中的在線過濾器等裝配應當按期洗濯或改換。

  以慣例硅膠為基質的鍵合相填料凡是的 PH 值合用規模是 2.0-8.0 , BDS C18 適合于堿性化合物, PH 值合用規模為 2.0-10.0 。當必須要在 PH 值合用規模的邊境前提下利用色譜柱時,每次利用竣事后當即用適合于色譜柱貯存并與所利用的活動彼此溶的溶劑洗濯,并完整置換掉本來所利用的活動相。

  ( 3 )、 樣品:

  樣品也要盡能夠潔凈,可選用樣品過濾器或樣品預處置柱( SPE )對樣品停止預處置;若樣品方便處置,要利用掩護柱。在用正相色譜法闡發樣品時,一切的溶劑和樣品應嚴酷脫水。

  2 、色譜柱的保管

  ( 1 )、 反相色譜柱天天嘗試后的頤養:

  利用緩沖液或含鹽的活動相,嘗試實現后利用 10% 的甲醇 / 水沖刷 30 分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖刷 30 分鐘。 注重:不能用純水沖刷柱子,應當在水中插手 10% 的甲醇,避免將填料沖陷落。

  ( 2 )、 持久保管色譜柱:

  如色譜柱要永劫間保管,必須存于適合的溶劑下。對反相柱能夠貯存于純甲醇或乙腈中,正相柱能夠貯存于嚴酷脫水后的純粹己烷中,離子互換柱能夠貯存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將采辦新色譜柱時附送的堵頭堵上。貯存的溫度最好是室溫。

  3 、色譜柱的再生

  由于色譜柱是耗損品,跟著利用時候或進樣次數的增添,會呈現色譜峰高降落,峰寬加大或呈現肩峰的景象,普通來講能夠是柱效降落。

  ( 1 )、 反相柱的再生 : 順次接納 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇:水 =10 : 90 ( V/V ),乙腈,異丙醇作為活動相沖刷色譜柱,實現后再以相反挨次沖刷色譜柱。

  ( 2 )、 正相柱的再生 : 順次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為活動相沖刷色譜柱,而后再以相反的挨次沖刷色譜柱。要注重上述溶劑必須嚴酷脫水。

  4 、色譜柱在利用進程中易呈現的題目和處理方法

  色譜柱在利用中最罕見的題目便是柱壓降低,若是柱壓是在永劫間利用進程中遲緩增添,屬于一般景象。但柱壓在利用進程中俄然降低(體系管路梗塞及壓力傳感器毛病除外),能夠的原因有以下幾點:

  ( 1 )、色譜柱頭的過濾篩板梗塞或凈化;

  ( 2 )、色譜柱頭的填料被樣品凈化;

  ( 3 )、色譜柱內緩沖液中的鹽碰到高濃度的甲醇或其余無機溶劑,構成結晶析出;

  ( 4 )、活動相 PH 值過大或太小使牢固相布局粉碎或消融。

  處理方法以下:

  ( 1 )、如肯定是色譜柱頭的過濾篩板被凈化,能夠將色譜柱反標的目的用甲醇沖刷至一般壓力,或卸下色譜柱頭,將其放在 10 %的稀硝酸內超聲洗濯 10 分鐘,后再用純水超聲 10 分鐘,從頭裝入色譜柱。

  ( 2 )、如肯定色譜柱頭的填料被凈化,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被凈化的填料,用不異的柱填料從頭填入,細心修復后,從頭裝置上柱頭螺絲。

  ( 3 )、如肯定定是鹽結晶,用 10% 的甲醇 / 水沖刷色譜柱使柱內鹽全數消融,再換高濃度甲醇。

  ( 4 )、若是因 PH 值利用不妥,很難規復。