卵白質定量(比色法)

　　卵白質凡是是多種卵白質的化合物，比色法測定的根本是卵白質組成成份：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團或染料反映，發生有色物資。有色物資的濃度與卵白質反映的氨基酸數量間接相干，從而反映卵白質濃度。

　　常常利用的比色方式普通有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方式。

　　Lowry 法：

　　以最早期的Biuret 反映為根本，并有所改良。卵白質與Cu2+反映，發生藍色的反映物。可是與Biuret比擬，Lowry 法敏理性更高。錯誤謬誤是須要挨次插手幾種差別的反映試劑;反映須要的時候較長;輕易遭到非卵白物資的影響;含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物資的卵白不合適此種方式。

　　BCA(Bicinchoninine　acid　assay)法：

　　這是一種較新的、更敏感的卵白測試法。要闡發的卵白在堿性溶液里與Cu2+反映發生Cu+，后者與BCA組成螯合物，組成紫色化合物，接收峰在562nm波長。此化合物與卵白濃度的線性干系極強，反映后組成的化合物很是不變。絕對Lowry法，操縱簡略，敏感度高。可是與Lowry法近似的是輕易遭到卵白質之間和去污劑的攪擾。

　　Bradford 法：

　　這類方式的道理是卵白質與考馬斯亮蘭連系反映，發生的有色化合物接收峰595nm。其最大的特色是，敏感度好，是Lowry 和BCA 兩種測試方式的2 倍;操縱更簡略，速率更快;只須要一種反映試劑;化合物能夠不變1小時，便利成果;并且與一系列攪擾Lowry，BCA 反映的復原劑(如DTT，巰基乙醇)相容。可是對去污劑仍然是敏感的。最首要的錯誤謬誤是差別的規范品會致使同一樣品的成果差別較大，無可比性。

　　某些初度打仗比色法測定的研討者能夠為各類比色法測出的成果并不分歧，感應利誘，事實該信任哪一種方式?由于各類方式反映的基團和顯色基團不一，以是同時利用幾種方式對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。比方：Keller等測試人奶中的卵白，成果Lowry，BCA 測出的濃度較著高于Bradford，差別明顯。即便是測定同一樣品，同一種比色法挑選的規范樣品不分歧，測試后的濃度也不分歧。如用Lowry測試細胞勻漿中的卵白質，以BSA作規范品，濃度1.34mg/ml，以a球卵白作規范品，濃度2.64mg/ml。是以，在挑選比色法之前，最好是參照要測試的樣本的化學組成，尋覓化學組成近似的規范卵白作規范品。別的，比色法定量卵白質，常常呈現的題目是樣品的吸光值太低，致使測出的樣品濃度與現實的濃度差異較大。關頭題目是，反映后1011分光光度計的主要配件—— 比色皿的色彩是有一定的半衰期，以是每種比色法都列出了反映測試時候，一切的樣品(包含規范樣品)，都必須在此時候內測試。時候太長，獲得的吸光值變小，換算的濃度值下降。

　　能夠存在的偏差：

　　反映溫度、溶液PH值等都是影響嘗試的主要緣由。另外，很是主要的是，最好是用塑料的比色法。防止利用石英或玻璃材質的比色皿，由于反映后的色彩會讓石英或玻璃著色，致使樣品吸光值不精確。