細胞凍存是細胞保管的首要方式之一。操縱凍存手藝將細胞置于一196~C液氮中高溫保管，能夠使細胞臨時離開發展狀況而將其細胞特征保管起來，如許在須要的時辰再蘇醒細胞用于嘗試。并且過度地保管必然量的細胞，能夠防止因正在培育的細胞被凈化或其余不測事務而使細胞丟種，起到了細胞保種的感化。除此以外，還能夠操縱細胞凍存的情勢來采辦、寄贈、互換和輸送某些細胞。 細胞凍存時向培育基中插手掩護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可以使溶液冰點下降，加上在遲緩凍結前提下，細胞內水份顯露出，削減了冰晶構成，從而防止細胞毀傷。 接納"慢凍快融"的方式能較好地保障細胞存活。規范冷凍速率起頭為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃以后可間接投入液氮內(-196℃)。蘇醒細胞時則間接將裝有細胞的凍存管投入40℃熱水中敏捷凍結。

　　資料：凍存管，離心管，細胞培育用資料，500 mL燒杯，膠布，琺瑯杯，75%酒精棉。

　　藥品：培育基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清，0.25%胰卵白酶溶液，二甲基亞砜(DMSO)或甘油，0.5%臺盼藍染液，液氮。

　　儀器：4℃冰箱，-70℃冰箱，液氮容器，微量加樣器，水浴鍋，離心計心情。

　　(一)細胞凍存

　　1.取待凍存的細胞用胰酶消化(見相干嘗試細胞傳代培育局部)，用培育基將細胞沖刷上去。800 r/min離心5 min，棄上清搜集細胞。若是是懸浮發展的細胞，則可間接離心搜集細胞。

　　2.插手適當凍存液(10%甘油+90%培育基，或10%DMSO+90%培育基)制成細胞懸液。細胞濃度宜大，3×106個/mL擺布，并可適當增添牛血清濃度至20%。

　　3.細胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標記(寫上細胞品種、時候及凍存前提等)。

　　4.凍存管在4℃下寄存30 min，轉放-20℃ 1.5～2 h，再轉人-70℃ 4-12 h后便可轉移到液氮內(-196℃)，注重停止掛號。

　　(二)細胞蘇醒

　　1.取一琺瑯杯盛上適當自來水加熱至40℃擺布。

　　2.從液氮中掏出凍存管當即投人40℃水中敏捷凍結。

　　3.掏出凍存管，用75%酒精潔凈管口，翻開。

　　4.離心去上清搜集細胞，用無血清培育基洗1次，加人3 mL新穎培育基，于小培育瓶中培育。

　　5.逐日察看細胞發展環境，若是死細胞較多，蘇醒第二天應換液。待細胞長滿后可停止傳代培育。