一、徒手制片

　　1. 徒手制片及特色

　　徒手制片(切片)普通指徒手用刀片(經常使用單面刀片)把新穎的動物資料切成薄片的制片方式。此法在動物制片中具備非常首要的位置，是一種遍及利用的制片方式。

　　徒手制片的首要長處是：能實時察看研討動物糊口構造的布局和自然色采;方式及器具簡略，不需切片機等機器裝備，短時候便可實現，這是其余方式所不迭的;

　　徒手制片的首要錯誤謬誤是：對藐小、柔嫩、水份過量和堅固的資料，難以用徒手切成薄片;對操縱不諳練者，常常切成厚薄不勻或不完全的切片。

　　2. 徒手制片的方式及注重事變

　　徒手制片最首要的東西便是刀片，常可用單面保安刀片。要取得杰出的切片，起首要堅持刀口的尖銳，切片前，先籌辦好一個培育皿盛好凈水，同時籌辦好顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片等器具，而后拿取資料遏制切片。資料能夠是新穎的資料，也能夠是顛末牢固的資料。

　　切片時，將欲切資料斷面和刀片上滴上凈水以堅持資料潮濕。以左手拇指、食指、中指捏住資料，拇指應低于食指，以避免切傷手指;資料超出跨越指尖。右手執刀，將刀平放在食指上，刀口朝內，刀面與資料斷面平行，而后以平均快速的舉措自左前方向右前方以臂力動員刀片程度切割挪動，不要用腕力。切片時還要注重，切時舉措要敏捷，資料一次切下，切忌擱淺或拉鋸式切割。持續切數片后，將切下的薄片悄悄移入盛水的培育皿中備用。而后遴選薄而通明的切片，放在載玻片上的水點中，加上蓋玻片制成姑且制片遏制察看。

　　用徒手切片的資料不宜過大，普通以外表不跨越5-8mm²為好。對過于柔嫩或藐小的資料(如葉片、藐小的根尖等)須要借助一些夾持物方可遏制切片，若是姑且制片需保管一段時候，(1)將資料封在水中，每隔20-30分鐘再加一滴水，此法可堅持數小時;(2)用10%-30%的甘油水溶液取代凈水封片，并將制片放在鋪有濕濾紙的大培育皿中保管，或用白臘或指甲油封邊保管，可保管1-2周或更永劫候。

　　二、壓片及涂片

　　涂片和壓片是遏制動物染色體察看研討經常使用的制片方式。此中涂片是將新穎的資料或是顛末牢固的資料于載片上，托涂成平均一層，經染色后蓋上蓋玻片鏡檢。壓片是將處置后的資料于載片上分手后加蓋片，用拇指或鑷子悄悄擠壓蓋片，使構造分手成一片，而后鏡檢。

　　用此法遏制染色體察看時注重，若遏制染色體數量測定請求取樣個別數在5個以上，細胞總數在30個以上;若遏制染色體核型闡發(組型闡發)則請求取樣應是來歷于差別個別的5個細胞。

　　1.取材：與細胞割裂興旺期間取樣，普通動物在上午9-12時，下戰書2-5時，普通取根尖、莖尖。

　　2.預處置(前處置)：目標是避免紡錘體的構成，使細胞割裂遏制在中期階段，從而取得較多的中期割裂相，同時預處置還能夠使染色體縮短變短，便于察看統計。經常使用的預處置藥劑有：0.05%-0.2%的秋水仙堿溶液、8-羥基喹啉0.002-0.004M、對二氯苯飽和水溶液、富民隆0.01-0.001%。預處置的時候普通為2-12小時。

　　3. 牢固：目標是把細胞敏捷殺死，是卵白質變性積淀，盡可能堅持資料布局的原有狀況。經常使用的牢固液為卡諾牢固液，即3：1的純酒精:冰醋酸溶液。牢固時候普通為1-24小時。

　　4.解離：用鹽酸處置牢固后的資料，使細胞分手，便于壓片。普通可用1N的HCl于60攝氏度下15-20分鐘或5N的HCl室溫下20-25分鐘。

　　5.染色：用卡寶-品紅或醋酸洋紅等核染色劑遏制染色。

　　6.壓片：將資料移至載玻片上，蓋上蓋玻片，而后悄悄擠壓蓋片，使資料成一薄層。

　　7.鏡檢：將制好的電影于顯微鏡下遏制染色體察看。

　　8.封片：姑且封片可用白臘封邊便可。好的電影可遏制冷凍枯燥，而后用光學樹膠封固保管。