轉染是不是勝利的影響身分良多，如須要轉染的細胞范例(對堅苦的細胞系出格如斯)，須要被轉染的份子(DNA、RNA、寡核苷酸、卵白質)，轉染試劑等。但不管在何種情況下，轉染的勝利均取決于轉染效力、低細胞毒性和重現性這幾個因素。

　　1、載體DNA

　　總則：對純化所得的載體停止品德判定。肯定保持其普通功效的基因序列是不是合適于您的細胞系統。在測定細胞系統的參數時，必然要選用一種已知具備功效的載體做對比。

　　·載體的完整性——載體是不是具備功效取決于它布局的完整性。轉染效力遭到質粒制備物的超螺旋布局和伸展布局之間比例、雙螺旋斷裂、核酸酶的降解，和來自于貯存和處置進程中的物理壓力的影響。

　　·載體制備物——各類載體是根據不同的計劃在細菌系統中制備并純化。制備產品中剩余的凈化物(如CsCl，內毒素)能夠或許或許會影響轉染效力。

　　·載體機關(啟動子/加強子/ORI)——轉染系統凡是用帶有強病毒調理元件(如，RSV，CMV，和SV40)的對比載體停止優化和比擬。但是，病毒啟動子/加強子系統的絕對有用性在不同細胞系間的不同可大到兩個數目級。比方，在某些細胞系中，由于自覺的質粒擴增，SV40系統可高效抒發large T抗原(如，COS);而在其余很多細胞系中，則是CMV啟動子更加有用。

　　除此以外，各類CMV載體的抒發率也會有跨越一個數目級的不同，這局部是由于載體中其余調理元件所引發的。

　　2、細胞

　　·貼壁細胞比擬擬懸浮細胞——在轉染效力方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的不同明顯。絕對貼壁細胞(如HEK，CHO)，懸浮細胞(如HL 60，Jurkat)很是難以轉染，能夠或許或許是由于細胞間膜布局的不同，但今朝還不份子程度上公道機制的詮釋。

　　·割裂細胞比擬擬非割裂細胞——割裂細胞常常要比運動細胞更容易于攝取并抒發外源DNA。是以對大大都轉染操縱而言，細胞都在轉染當天或前一天種板。一樣主要的是細胞在種板停止轉染時不應處于過分發展的狀態;另外，還經常利用促有絲割裂安慰物(如，病毒轉化，發展因子，前提培育基，和滋潤細胞)來活化原代培育細胞。

　　·分板計劃——在對培育細胞停止分板傳代培育之前，必須把貼壁細胞用胰卵白酶消化使之離開培育基質。這個慣例操縱可致使普通細胞功效遭到嚴峻侵害。是以分批計劃的不同(如，胰卵白酶消化時辰的是非，胰卵白酶的滅活等)須要優化。

　　·傳代次數——傳代次數是指對一個細胞系停止分批傳代的頻度(凡是在一個嘗試室規模內)。某些細胞系比擬擬其余細胞系而言較不不變，能夠或許或許會跟著培育時辰的耽誤而轉變，視不同的細胞系和培育前提而定。是以稱號不異的同一細胞系在心理學和形狀學(和轉染能力)性子也能夠或許或許會有很大的不同。普通而言，細胞在凍存蘇醒后的一兩代以內或直到它們完整蘇醒之前都很難轉染。

　　·細胞數目(融會率)——只需培育基質(構造培育皿)另有空間，細胞就會按指數紀律割裂。對普通細胞而言，細胞發展的速率受細胞密度巨細的按捺(打仗按捺)，但癌細胞則不受此限定而會延續發展并可相互疊加。養分物資的耗竭和代謝廢料的儲蓄積累會影響一切的細胞發展。細胞會因遭到養分物資匱乏的壓力而不適于轉染。報告基因的抒發率與轉染起頭時的細胞數目和細胞安康和細胞消融之前的發展情況相干。

　　·培育物凈化——培育物可被細菌、酵母、真菌、病毒、支原體、乃至其余細胞品種所凈化。各類凈化城市致使發生毛病的成果。

　　·支原體凈化——支原體凈化在一切培育細胞中的比例為5-35%，它可轉變細胞發展特征，酶的感化路子，細胞膜的構成，染色體布局，和轉染效力。出格是，支原體對接納脂質、DEAE-右旋糖酐、磷酸鈣或腺病毒介導的轉染手藝有所攪擾，其成果致使非典范轉染或轉染效力偏低。這些影響會致使嘗試成果的不靠得住和時辰和名貴細胞系的喪失。和細菌及真菌不同，支原體凈化沒法經由過程視覺查抄發明。它們很是小乃至能夠或許或許經由過程大大都的無菌濾膜;它們還對經常利用抗生素有抗藥性。以是必需停止支原體凈化的慣例篩查。

　　3、穿插凈化

　　若是同一個嘗試室同時培育不同品種的細胞，那就有能夠或許或許發生穿插凈化，即便遵守最嚴格的分手操縱規程這類情況也有能夠或許或許發生。若有很多細胞系被HeLa細胞所凈化。和其余細胞系之間的穿插凈化不老是能經由過程鏡檢發明。若是有少許某種發展疾速的細胞摻入到培育細胞種，幾個月事后它們就會完整代替方針培育物。

　　4、構造培育試劑

　　普通準繩：優化您的細胞發展前提。只利用新穎配制的培育基和增添劑，并盡能夠或許或許削減所用試劑的變革。

　　·根本培育基——培育基的成份包含養分物資(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，緩和沖物資。有些成份很是不不變，是以若是在利用時不是新穎，插手就能夠或許或許會發生題目。設置裝備擺設時要使培育基務必避光保管;由于已知有一些組分緩和沖物資，如HEPES，當裸露于光照下就會分化發生細胞毒性物資。

　　·胎牛血清——血清是一種含有白卵白、球卵白、發展增進因子和發展按捺因子的極其龐雜的混和物。收羅血清所用植物的春秋、養分程度和安康狀態可影響到血清中這些成份的數目和品德，從而引發明顯生物學變更。

　　·增添劑——某些細胞的發展依靠于一些對性命力或細胞割裂必不可少的物資(如，發展因子，微量元素，必需代謝物和卵白等)。

　　·CO2培育箱——細胞發展所需情況為37℃、絕對濕度為95%的CO2培育箱。用CO2是為了節制pH值，細胞心理對pH的變更很是敏感，是以大都細胞培育基都含有碳酸氫鹽緩沖系統。有些培育基須要CO2 濃度為5%來有用節制pH值，而另外一些則須要10%的CO2。須要向您的培育基供給者查對一下恰當的CO2濃度。若是培育箱內培育前提與所需前提不分歧(溫度、濕度和CO2)則會致使嘗試成果的板間變異。來自于培育箱內的凈化物、化學物資，或真菌/細胞的凈化也都能夠或許或許影響到細胞心理。

　　5、剎時轉染和不變轉染

　　制備一種不變細胞系的第一步是挑選一種同時含有挑選性標記物和目標基因的載體。挑選性標記物凡是是能夠或許發生一種卵白質或酶來贊助細胞在某些毒性物資存在下存活的基因。

　　一旦選好了質粒載體，不管剎時或不變抒發都接納一樣的轉染方式。在插手挑選性試劑之前，被轉染的細胞最少要在規范培育基中培育留宿。如許就使細胞偶然候抒發充足的卵白使之能夠或許或許耐受挑選性試劑的感化。細胞因而在加有挑選性試劑的培育基中發展。那些未勝利轉染質粒的細胞即被殺死。而只要那些勝利轉染的細胞能夠或許或許發展。有的時辰，還能夠或許將挑選性試劑延續插手到培育基中，以保持對細胞的挑選壓力。

　　6、轉染計劃

　　普通準繩：成立一套恰當的轉染計劃;起首從一種規范計劃起頭，而后經由過程轉變試劑/DNA的配比和復合物的劑量停止優化。

　　·轉染復合物的制備——諸如轉染試劑/DNA配比，離子強度，緩沖液pH值，和溫度等變量城市影響到轉染復合物的構成和功效。質粒可用無菌水或TE緩沖液濃縮。若是您要利用一種市售的轉染試劑，就該當細心瀏覽該試劑所供給的利用申明。在不含血清或其余卵白的培育基中制備轉染復合物;若是制備復合物所利用的培育基含有血清，它就會對轉染發生按捺。制備轉染復合物的最好孵育時辰是一個很是關頭的關鍵，對不同的轉染試劑而言能夠或許或許不同很大。

　　轉染試劑/DNA配比(負載比)——一切的轉染試劑城市在某一個試劑/DNA配比時最有用。偶然候這類最好配比的地點規模很是狹小;對每種嘗試系統都必須停止優化能力獲得最好配比。