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考馬斯藍染色法道理

[2013/9/25]
  考馬斯亮藍法也稱考馬斯藍染色法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。因為其凸起的長處,正獲得愈來愈普遍的利用。

  考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定卵白質含量屬于染料連系法的一種。在游離狀況下呈白色,最大光接收在488nm;當它與卵白質連系后變為青色,卵白質-色素連系物在595nm波長下有最大光接收。其光接收值與卵白質含量成反比,是以可用于卵白質的定量測定。卵白質與考馬斯亮藍G-250連系在2min擺布的時候內到達均衡,實現反映很是敏捷;其連系物在室溫下1h內堅持不變。該法是1976年Bradford成立,試劑配制簡略,操縱簡潔疾速,反映很是活絡,活絡度比Lowry法還高4倍,可測定微克級卵白質含量,測定卵白質濃度規模為0~1 000μg/mL,最小可測2.5μg/mL卵白質,是一種經常使用的微量卵白質疾速測定方式。

  考馬斯亮藍有G250和R250兩種。此中考馬斯亮藍G250因為與卵白質的連系反映很是敏捷,經常使用來作為卵白質含量的測定。考馬斯亮藍R250與卵白質反映固然比擬遲緩,可是能夠被洗脫下去,以是能夠用來對電泳條帶染色。

  注重:

  考馬斯亮藍和皮膚中卵白質經由過程范德華力連系,反映疾速,并且不變,沒法用通俗試劑洗掉。待一兩周擺布,皮屑細胞天然朽邁零落便可無礙。