嘗試步驟

　　1. 操縱RNeasy Plant Mini Kit提取總RNA

　　1. 于1.5 ml離心管中插手0.5 ml RLT緩沖液和5ul β-巰基乙醇;

　　2. 稱取約100 mg資料，液氮研磨后轉移到提取液中，渦旋混勻，56℃，2 min;

　　3. 插手紫色柱子，23℃， 12000 rpm，離心2 min;

　　4.濾液轉入一新的1.5 ml離心管中，插手1/2體積的無水乙醇，用槍頭混勻，移入粉色柱子，23℃， 12000 rpm，離心15 sec;

　　5. 棄濾液，插手700 ul RW 1，23℃，12000 rpm，離心15 sec;

　　6. 將柱子移入一新的2 ml搜集管，插手500 ul RPE，23℃， 12000 rpm，離心15 sec;

　　7. 棄濾液，插手500ul RPE，23℃， 12000 rpm，離心2 min;

　　8. 加20 ul DEPC處置過的水，室溫靜置15 min，23℃，12000 rpm，離心1 min;

　　9. 再別離插手40 ul和20ul DEPC處置過的水，室溫靜置15 min，23℃，12000 rpm離心1 min;

　　10. 歸并三次搜集的RNA，取2ul電泳檢測純度和品德。-20℃短時候保管，或-80℃持久保管。

　　2. 操縱TRIZOL試劑盒提取RNA

　　1. 于1.5 ml離心管中插手1 ml TRIZOL提取液;

　　2. 稱取約100 mg液氮研磨后的資料，轉移到提取液中，混勻，2-8℃，≤12000 g離心10-15 min;

　　3. 取上清，于15-30℃安排5min，加0.2 ml氯仿，猛烈動搖15 sec， 15-30℃安排2-3min，2-80C， ≤12000 g，離心15 min;

　　4. 打水相，加等體積異丙醇，15-30℃安排10 min，2-8℃，<12000 g，離心10 min;

　　5. 用75%乙醇洗濯積淀，2-8℃，<7500g離心5 min;用DEPC處置的水消融RNA，-20℃短時候保管，或-80℃持久保管。

　　3. CTAB法提取動物總RNA

　　1. 50 ml離心管中插手15 ml CTAB提取緩沖液(需插手300ul β-巰基乙醇)，65℃預熱;

　　2. 稱2-3 g新穎的動物資料，在液氮中充實研磨成粉末;

　　3. 樣品轉入50 ml離心管中，敏捷震動混勻至無成團結塊，65℃溫浴10 min，再插手15 ml氯仿，混勻;

　　4. 室溫下，10000 rpm，離心15 min，下層水相移入一個新的離心管，插手等體積的氯仿，混勻后再抽提一次;

　　5. 將下層水相轉入另外一離心管中，插手 8M的LiCl，使終濃度為2M(約插手水相的 1/3)，4℃，留宿;

　　6. 4℃，12000 rpm，離心20 min積淀RNA棄上清，用70%乙醇洗濯積淀，晾干;

　　7. 插手500ul SSTE消融積淀，轉移至1.5 ml離心管中，插手等體積酸性酚/氯仿后混勻;

　　8. 室溫下，13000 rpm，離心10 min，將下層水相轉移至另外一1.5 ml離心管中，插手等體積的氯仿后混勻;

　　9. 室溫下，13000 rpm，離心10 min，下層水相轉移至新管中，插手1/10體積的3M NaAC和2倍體積無水乙醇，-80℃靜置30 min;

　　10. 4℃，13000 rpm，離心20 min，70%乙醇洗濯積淀，烘干后插手50 ul DEPC處置H20消融RNA，取1ul電泳檢測，-80℃保管備用。

　　4. RNA的純化

　　1. DEPC水處置的1.5 ml離心管中插手：45ul RNA，7.5ul l0XDnase Assay Buffer，20U RNase inhibitor 1.5ul Dnase I，夾雜液于37℃溫浴30 min;

　　2. 用DEPC-H20將溶液體積調至250ul，加1/10體積的3 M NaAC(pH 5.2)和2倍體積冷的無水乙醇，混勻，-20℃安排30 min;

　　3. 4℃，12000 rpm，離心20 min，積淀RNA;

　　4. -20℃預冷的70%乙醇洗一次，-20℃預冷的100%乙醇洗一次;

　　5. 枯燥后，用20 ul DEPC處置的H2O消融，-20℃保管。