hoechest33342和hoechst33258兩種(首要為凋亡活細胞)在紫外光下將核染為藍色。Hoechst染細胞核會影響共聚焦顯微鏡對該樣本其余熒光的察看結果。hoechsthoechsts33258，hoechst33342兩者辨別不大，可是hoechst33342對細胞的毒性感化更小一些，以是普通來講hoechsts33258用于細胞牢固后再染色，而hoechst33342則能夠或許對活細胞間接停止染色!

　　染色步驟

　　PI(PropidiumIodide碘化丙啶)染色：是一種可對DNA染色的細胞核染色(PropidiumIodide，PI)是一種核酸染料(紅試劑，經常使用于細胞凋亡檢測。碘化丙啶色)，它不能透過完全的細胞膜，但凋亡中初期的細胞和壞死細胞因為細胞膜通透性的增添，PI能夠或許透過細胞膜而使細胞核染紅。

　　用PI單一染色察看培育細胞，只能表現細胞的壞死環境，而不是凋亡(固然初期凋亡PI亦可著色)。可是若是您只是想曉得細胞的滅亡環境，而不是細心辨別壞死或凋亡，那末PI單一染色也能夠或許。可是若是您必然要認定細胞的凋亡，那末PI單一染色明顯不夠!

　　annexin-v染色細胞凋亡初期，細胞膜標記發生轉變。此中，磷脂酰絲氨酸(Annexin-V，PS)外翻，Annexin-V在Ca2+存在的前提下與其高親和力特同性連系。如許，Annexin-v染色陽性，表現細胞處于初期凋亡狀況。Annexin-V連系差別的熒光抗體，就能夠或許操縱流式細胞儀、熒鮮明微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。AnnexinV用FITC標記發綠色熒光;若是用PE標記就發白色熒光。

　　JC-1染色JC-1是一種陽離子染料，能夠或許在線粒體內堆積，低濃度時首要以單體(monomer)存在，發射光以綠光(～525nm)為主;而在高濃度時則能夠或許構成多聚體(aggregation)，發射光以紅光(-590nm)為主。線粒體自身存在必然的極性(polarization)，其外膜為負極，內膜為正極。電位差由Ca2+、Na+和H+流調控。當線粒體狀況杰出時對JC-l攝取量少，是以在線粒體內首要以單體的情勢存在綠光強度/紅光強度的比值較高。

　　在線粒體發生去極化(depolarization)時，線粒內JC-l的濃度較高，多以多聚體的情勢存在，綠光強度/紅光強度的比值下降。JC-1染色的綠光強度/紅光強度僅取決于線粒體的膜電勢(membranepotential)，而與線粒體的形狀、體積和密度都有關，是以能更好地反應線粒體的功效狀況。因為凋亡發生的初期存在線粒體的去極性，是以，JC-1染色被用于檢測凋亡的初期發生。其嘗試方式以下。

　　JC-l染色很是簡略。起首可將制品JC-1以DMSO配成貯存液(1~5 mg/ml)，貯存于-20℃，用時以培育液濃縮至10 ug/ml 終濃度。對貼壁細胞能夠或許間接棄去培育液，漂洗細胞后間接插手染色液，10~30 min后在熒鮮明微鏡下或激光共聚焦下察看。線粒體狀況好時細胞以綠色為主，當紅光旌旗燈號加強時，紅綠相疊，以橙色為主。該染色應用于懸浮細胞時還能夠或許經由過程流式細胞儀停止檢測，搜集紅/綠旌旗燈號強度，計較其強度比。

　　鈣黃綠素-AM(Calcein-AM)：Calcein-AM自身并不是熒光份子，但經由過程活細胞內的酯酶感化，Calcein-AM能脫去AM基，發生的Calcein能收回強綠色熒光(激起：490 nm，發射：515 nm)。是以Calcein-AM僅對活細胞染色。