1. 掏出細胞爬片，敏捷置入冷丙酮牢固 20~30 分鐘

　　2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

　　3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

　　4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

　　注：第 3、4 步僅用于檢測細胞內抗原，檢測細胞膜抗原時不必。

　　5. 一般血清封鎖：從染片缸中掏出切片，擦凈切片反面水份及切片正面構造四周的水份 (堅持構造呈潮濕狀況,)滴加一般山羊或兔血清 (與第二抗 體 同源植物血清)處置，37℃，15 分鐘。

　　附：一般血清配制 ( 或按試劑盒劃定的濃度配制)：按 1:20比例，用 PBS 配制，每張切片須要量按 50μ+5μl (10%拋灑量) 計較。

　　6. 滴加第一抗體：用濾紙吸去血清，不洗，間接滴加第一抗體，37℃ 2 小時(也可置于 4℃冰箱留宿) 。

　　7. PBS：5 分鐘，2 次(置于搖床) 。

　　8. 滴加生物素化的二抗，37℃，40 分鐘。

　　9. PBS：5 分鐘，2 次(置于搖床) 。

　　10. 滴加三抗 (SAB 復合物) ，37℃，40 分鐘。

　　11. PBS：5 分鐘，2 次(置于搖床) 。

　　12. DAB 顯色，鏡下察看，當令停止(自來水沖停止) 。

　　附：DAB 的配制① 儲蓄液(DAB 25mg/ml)的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待完整消融后分裝成 1ml，100μl，50μl ，20μl 等，-20℃，凍存。② 任務液：DAB 儲蓄液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl

　　13. 自來水(細水)充實沖刷。

　　14. 蘇木素復染，室溫，30 秒，自來水沖刷。

　　15. 自來水沖刷返藍，15 分鐘。

　　16. 梯度酒精脫水：80%，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%，2 次，5 分鐘。

　　17. 二甲苯通明：I ，II (二甲苯)各 5 分鐘

　　18. 封片：加拿大樹膠(或中性樹膠)封片。