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薄層色譜法規范操縱規程

[2013/5/9]
  1、簡述:薄層色譜法,是將合適的牢固相涂布于玻璃板上,成一平均薄層。等點樣、睜開后,與合適的對比物按同法所得的色譜圖作對比,用以停止藥品的辨別,雜質查抄或含量測定的方式。

  2、儀器與資料:

  2.1 玻板:除還有劃定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,請求滑膩,平坦、洗凈后的不附水珠,晾干。

  2.2 牢固相或載體:最經常利用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒巨細,普通請求直徑為10-40μm。薄層涂布,普通可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將牢固相間接涂布于玻璃板上,后者系在牢固相中加入必然量的粘合劑,普通經常利用10-15%煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小時),混勻后加水適當利用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5-0.7%)適當調成糊狀,平均涂布于玻璃板上。也有含必然睜開液或緩沖液的薄層。

  2.3 涂布器:應能使牢固相或載體在玻璃板上涂成一層合適厚度請求的平均薄層。

  2.4 點樣器:經常利用具支架的微量打針器或按時毛細管,應能使點樣地位準確集合。

  2.5 睜開室:應利用合適薄層板巨細的玻璃制薄層色譜睜開缸,并有周密蓋子,除還有劃定外,底部應平坦滑膩,應便于察看。

  3、操縱方式:

  3.1 薄層板制備:除還有劃定外,將1份牢固相和3份水在研缽中向一方向研磨夾雜,去除外表的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上安穩地挪動涂布器停止涂布(厚度為0.2-0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置程度臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘。即置有枯燥劑的枯燥箱中備用。利用前查抄其平均度(可經由過程透射光和反射光檢視)。

  3.2 點樣:除還有劃定外,用點樣器點樣于薄層板上,普通為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2-4mm,點間間隔約為1.5-2.0cm,點間間隔可視雀斑分散環境以不影響檢出為好。點樣時必須注重勿毀傷薄層外表。

  3.3 睜開:睜開室如需事后用睜開劑飽和,可在室中加入充足量的睜開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入睜開劑中,密封室頂的蓋,使體系均衡或按注釋劃定操縱。將點好樣品的薄層板放入睜開室的睜開劑中,浸入睜開劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm(切勿將樣點浸入睜開劑中),密封室蓋,等睜開至劃定間隔(普通為10-15cm),掏出薄層板,晾干,按各類類項下的劃定檢測,如需用薄層掃描儀對色譜雀斑作掃描檢出,或間接在薄層上對色譜雀斑作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方式,除還有劃定外,可按照各類薄層掃描儀的布局特色及利用申明,連系詳細環境,挑選接收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。因為影響薄層掃描成果的身分良多,故應在保障供試品的雀斑在必然濃度規模內呈線性的環境下,將供試品與對比品在同一塊薄層上睜開后掃描,停止比擬并計較定量,以削減偏差。各類供試品,只要取得分手度和重現性好的薄層色譜,能力取得對勁的成果。

  4、注重事變:

  4.1 所用玻璃板應洗凈不掛水珠,滑膩平坦。

  4.2 鋪板要平均,厚度合適,并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘,置于有枯燥劑的枯燥箱或枯燥器中備用。

  4.3 點樣點普通為圓點,不能太大。