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病毒保管:超高溫法

[2013/3/18]
  大大都微生物可用超高溫保管,超高溫保管法是合用規模最廣的微生物保管法。須要龐雜養分的微生物種,如用其余的儲存體例不能堅持其活氣( 如動物的病原性真菌),凡是可用超高溫的體例保管(ATCC 1983;Halliday,Baker 1985)。此法是將凍存在小管或安瓿里的細胞以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷凍,直至—150℃,再將這些小管儲存在—150~-196℃的液氮中。

  超高溫的冷凍掩護劑差別于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常常使用一種由甘油(10%)、二甲亞砜(5%)和培育液制成的夾雜劑保管大都的細胞株。這些化學試劑進入細胞內可防止內膜的冷凍毀傷。儲存在高溫容器內的細胞蘇醒時必須謹慎操縱。當小管被加熱時,所構成的冰晶會將細胞殺死,準確操縱便可防止這類變亂。只需敏捷將樣品凍結就可以削減活氣的喪失,做法是:將封口的小管敏捷放入37℃的水中,直至一切的冰熔化,而后翻開管口,將內容物移入培育基。

  超高溫收藏的微生物必須一直儲存在溫度很是低的情況中,是以須要液氮罐。在持久儲存的進程中必須常常注重補充液氮。這類儲存體例比凍干法須要更多的經費,包含為了保持儲存溫度所須要的休息力和液氮等。

  資料

  病毒超高溫保管所需資料有:熱縮短塑料管,液氮罐,防護手套和面罩,永遠性暗號筆,氣體噴燈,裝液氮的保溫瓶。

  體例

  (1)剪一段兩頭各超越冷凍管長度2cm 的熱縮短塑料管。

  (2)將含有廓清病毒懸液(構造培育的上清培育基,或構造培育基內的細胞消融產品都可)冰浴幾分鐘,用滅菌移液管將0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內,并將蓋子擰緊。

  (3)將有病毒的冷凍管放入熱縮短塑料管中部,拔出準確的標簽。

  (4)用噴燈謹慎加熱熱縮短塑料管,并使之包住冷凍管。注重不要用太高的溫度加熱熱縮短塑料管。

  (5)再謹慎加熱熱縮短塑料管的兩頭,用大號鑷子夾緊管的端口至完整密封。

  (6)將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操縱時請求戴面罩和手套)。

  (7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內,同時記實樣品的具體的寄存地位、嘗試編號和寄存日期等。

  (8)須要用時,敏捷從液氮罐內掏出所需樣品,并投入37℃水浴箱中凍結后,用剖解刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱縮短塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不須要撤除熱縮短塑料管。

  其余相干生物試劑:

  通俗胎牛血清

  優級胎牛血清

  特級胎牛血清

  根本培育基