慣例轉染手藝可分為兩大類,一類是剎時轉染,一類是不變轉染(永遠轉染).前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,是以一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,發生高程度的抒發,但凡是只延續幾天,多用于啟動子和別的調控元件的闡發.普通來講,超螺旋質粒DNA轉染效力較高,在轉染后24-72小時內(依靠于各類差別的構建)闡發成果,常常用到一些報告體系如熒光卵白,β半乳糖苷酶等來贊助檢測.后者也稱不變轉染,外源DNA既能夠整合到宿主染色體中,也能夠作為一種游離體(episome)存在.雖然線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高.外源DNA整合到染色體中幾率很小,約莫1/104轉染細胞能整合,凡是須要經由過程一些挑選性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等頻頻挑選,取得不變轉染的同源細胞系。

　　轉染手藝的挑選對轉染成果影響也很大,很多轉染方式須要優化DNA與轉染試劑比例,細胞數目,培育及檢測時候等.一些傳統的轉染手藝,如DEAE右旋糖苷法,磷酸鈣法,電穿孔法,脂質體法各有益害,其首要道理及利用特色以下：

　　磷酸鈣法

　　磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞 不變轉染

　　剎時性轉染 不合用于原代細胞

　　操縱簡潔但反復性差

　　有些細胞不合用

　　DEAE-右旋糖苷法

　　帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架彼此感化構成的復合物被細胞內吞 剎時性轉染 絕對簡潔、成果可反復 但對細胞有一定的毒副感化 轉染時需除血清

　　電穿孔法

　　高脈沖電壓粉碎細胞膜電位,DNA經由過程膜上構成的小孔導入 不變轉染 剎時性轉染

　　一切細胞 合用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大, 需按照差別細胞范例優化電穿孔嘗試前提

　　病毒介導法

　　經由過程侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 不變轉染 可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等

　　逆轉錄病毒

　　特定宿主細胞 但照顧基因不能太大細胞需處罰裂期 需斟酌寧靜身分

　　腺病毒

　　經由過程侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 剎時轉染 特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞

　　需斟酌寧靜身分

　　陽離子脂質體法 帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團構成復合物被細胞內吞 不變轉染 剎時性轉染

　　一切細胞 合用性廣,轉染效力高,反復性好,但轉染時需除血清.轉染結果隨細胞范例變更大

　　Biolistic顆粒通報法

　　將DNA用顯微重金屬顆粒積淀,再將包被好的顆粒用彈道裝配投射入細胞,DNA在胞內慢慢開釋,抒發 剎時性轉染 可用于：人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系和原代細胞

　　顯微打針法

　　用顯微操縱將DNA間接注入靶細胞核 不變轉染 剎時性轉染 轉染細胞數無限

　　多用于工程革新或轉基因植物的胚胎細胞

　　各類轉染方式的比擬：

　　除上述傳統方式外,比來幾年來國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染手藝,以其合用宿主規模廣,操縱簡潔,對細胞毒性小,轉染效力高遭到研討者們的喜愛.此中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的轉染機能最好,但樹枝狀聚合物的布局不易于進一步改性,且其分化工藝龐雜.聚乙烯亞胺是一種具備較高的陽離子電荷密度的無機大份子,每相隔二個碳個原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物收集在任何pH下都能充任有用的“質子海綿”(proton sponge)體.這類聚陽離子能將各類報告基因轉入各類種屬細胞,其結果好過脂質聚酰胺,經進一步的改性后,其轉染機能好過樹枝狀聚合物,并且它的細胞毒性低.大批嘗試證實,PEI長短常有但愿的基因醫治載體.今朝在設想更龐雜的基因載體時,PEI常常做為焦點構成成份。

　　線型PEI(Line PEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉染載體的研討比分枝狀PEI(Branched PEI,BPEI)要早一些,曩昔的研討以為在不斟酌詳細前提,LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低,有益于細胞定位,是以與BPEI比擬應當轉染效力高一些.但比來研討標明BPEI的分枝度高有益于構成小的轉染復合物,從而進步轉染效力,但同時細胞毒性也增大.超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額定的仲胺基和叔胺基,在染嘗試中發明這類PEI的毒性低,但轉染效力卻較高。

　　GenEscort是接納各類分枝狀和超高分枝狀的小份子PEI與各類含有心理前提下可降解鍵的交聯劑交聯,分化出的一系列高分枝的可降解的PEI衍生物.聚合物的分枝布局使得其具備較高的正電性,是以易于高效地包裹各類DNA、RNA份子及質粒構成小的納米顆粒,從而進步轉染效力,當所構成復合物進入細胞今后,此中所含的心理前提下可降解的化學鍵在細胞內水解,使交聯聚合物分化為無細胞毒性的小份子PEI,如許布局的轉染試劑在體外利用能夠取得高的轉染效力和低的細胞毒性,其可降解性對體內利用也具備主要的意思。