一、免疫標記法及其分類

　　1.熒光免疫法

　　道理是操縱一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮，檢測產品收回的熒光，熒光強度與Mb濃度呈反比，可在8min內得出成果。成果以Mb每小時開釋的速度表現(△Mb)表現。該法反復性好，線性規模寬，具備疾速、敏感、精確的特色。

　　以雙抗夾心法為例，起首將特同性抗體與固相載體毗連，構成固相抗體。撤除未連系抗體，而后加受檢標本，使此中的卵白抗原與固相抗體構成抗原抗體復合物。洗濯撤除未連系物，接著插手熒光標記的抗體，使之與抗原特同性連系，構成抗體—抗原—抗體復合物。最初按照熒光強度，便可對卵白抗原停止定量。

　　傳統的熒光免疫法受本底熒光的攪擾較大，時候分辯熒光免疫測定法是以具備拿手壽命的稀土金屬如銪，作為標記物，插手一般液后激起測定，能有用去除短折命本底熒光的攪擾。

　　2.噴射免疫法

　　噴射免疫法是以適量的未標記抗原與噴射性物資標記的抗原，合作性地與抗體連系，構成有噴射性的抗原—抗體復合物與無噴射性的抗原—抗體復合物，并有過剩的標記抗原與未標記的抗原。而后經由過程離心積淀等方式，將抗原—抗體復合物與游離抗原分手，別離測定其噴射性強度與規范曲線比擬，便可對未標記的待測抗原停止定量。

　　RIA法測定血清卵白活絡度高、特同性強，可精確定量到ng/ml程度。但初期的方式操縱費事，耗時長，且有噴射性凈化。最近幾年來，跟著單克隆抗體的操縱，RIA的活絡度又有了較大進步，且操縱大為簡化，并已有商品試劑盒供給，操縱便利。

　　3.酶聯免疫法(ELISA)

　　ELISA法有合作法和夾心法兩種。合作法是基于規范或血清Mb和微孑L板上包被的Mb合作性地與單克隆抗體相連系的道理而成立，該法的最低檢測限為10μg/L，線性規模達1 000ug/L。夾心ELISA法與EIA具備杰出的相干性(r=0.92)。ELISA法具備活絡度高，特同性強，精密度好，操縱簡略，合用于多份標本的檢測，不需特別儀器裝備等長處，易于推行進步。但不合適急診的疾速檢測。

　　以雙抗法為例。起首包被抗原，而后插手一抗，使一抗與包被抗原構成抗原—抗體復合物。接著插手酶標二抗，構成抗原—抗體—抗體復合物。最初插手底物，由酶催化底物天生產品。經由過程產品的天生量便可對卵白抗原停止定量。

　　4.偶聯生物素—親和素體系的酶免法

　　操縱了一個親和素份子能夠與4個生物素份子連系的特征，使傳統的活絡度較高的酶免法的活絡度又有較著的縮小感化。

　　5.時候分辯熒光免疫闡發

　　時候分辯熒光免疫闡發(Time resolved Fluor immunoassay，TRFIA)是一種非同位素免疫闡發手藝，它用鑭系元素標記抗原或抗體，按照鑭系元素螯合物的發光特色，用時候分辯手藝丈量熒光，同時檢測波長和時候兩個參數停止旌旗燈號分辯，可有用地解除非特異熒光的攪擾，極大地進步了闡發活絡度。

　　6.解離加強鑭系元素熒光免疫闡發

　　解離加強鑭系元素熒光免疫闡發(Dissociation Enhanced Lanthanide Fluor immunoassay DELFIA)是時候分辯熒光免疫闡發中的一種。它器具備雙功效基連合構的螯合劑，使其一端與銪(Eu)毗連，另外一端與抗體/抗原份子上的自在氨基毗連，構成EU標記的抗體/抗原，顛末免疫反映以后天生免疫復合物。由于這類復合物在水中的熒光強度很是弱，是以插手一種加強劑，使Eu3 從復合物上解離上去，自在Eu3 同加強劑中的另外一種螯合劑螯合構成一種膠態份子團，這類份子團在紫外光的激起下能收回很強的熒光，旌旗燈號加強了百萬倍。由于這類闡發方式操縱領會離加強步驟，是以稱為解離加強鑭系元素熒光免疫闡發。

　　二、熒光抗體染色方式及其分類

　　1.直接染色法

　　將標記的特異熒光抗體直接加在抗原標本上，經必然溫度和時候的染色，洗去未到場反映的過剩熒光抗體，在熒鮮明微鏡下便可見到被檢抗原與熒光抗體構成的特同性連系物而收回的熒光。直接染色法的長處是：特同性高，操縱簡潔，比擬疾速。錯誤謬誤是：一種標記抗體只能查抄一種抗原，敏理性較差。直接法應設陰、陽性標本對比，按捺嘗試對比。

　　2.直接染色法

　　若是查抄未知抗原，先用已知未標記的特異抗體(第一抗體)與抗原標本停止反映，感化必然時候后，洗去未反映的抗體，再用標記的抗抗體即抗球卵白抗體(第二抗體)與抗原標本反映，若是第一步中的抗原抗體相互產生了反映，則抗體被牢固或與熒光素標記的抗抗體連系，構成抗原-抗體-抗抗體復合物，再洗去未反映的標記抗抗體，在熒鮮明微鏡下可見熒光。在直接染色法中，第一步操縱的未用熒光素標記的抗體起著兩重感化，匹敵本來提及抗體的感化，對第二步的抗抗體又起抗原感化。若是查抄未知抗體則抗原標本為已知的待檢血清為第一抗體，基他步驟和查抄抗原不異。

　　由于免疫球卵白有種屬特同性，是以標記的抗球卵白抗體必須用第一抗體同種的植物血清球卵白免疫其余植物來制備。

　　直接染色法的長處是既能查抄未知抗原，也能查抄求知抗體;用一種標記的抗球卵白抗體，能與在種屬上不異的一切植物的抗體連系，查抄各類未知抗原或抗體，敏理性高。錯誤謬誤是：由于到場反映的身分較多，受攪擾的能夠性也較大，判定成果偶然較難，操縱煩瑣，對比擬多，時候長。直接法應設陰、陽性標本對比，還應設有中間層對比(即中間層加陽性血清取代陽性血清)。

　　3.抗補體染色法

　　抗補體染色法簡稱補體法，是直接染色法的一種改進法，起首由Goldwasser等成立。本法操縱補體連系反映的道理，用熒光素標記抗補體抗體，判定未知抗原或未知抗體(待檢血清)。染色法式也分二步：先將未標記的抗體和補體加在抗原標本上，使其產生反映，水洗，而后再加標記的抗補體抗體。若是第一步中抗原抗體產生反映，構成復合物，則補體便被抗原抗體復合物連系，第二步插手的熒光素標記的抗補體抗體便與補體產生特同性反映，使之構成抗原-抗體-補體-抗補體抗體復合物，收回熒光。

　　抗補體染色法具備和直接法不異的長處，另外，另有其怪異的長處：即只要要一種標記抗補體抗體，便能檢測各類抗原-抗體體系。由于補體的感化不特同性，它能夠與任何哺乳植物的抗原-抗體體系產生反映。它的錯誤謬誤是到場反映的成份多，染色法式較龐雜，比擬費事。

　　除上述三種方式外，另有在此根本演出變出的一些方式，如雙層法、夾心法、夾雜法、三層法、抗體-抗補體法等等。