在色譜儀器微型化進程中，尺寸的削減不只要斟酌資料的性子和制作上的可以或許，還要從道理上斟酌尺寸削減后所帶來的一系列題目。這些題目包含:

　　(1)分手體系中被分派的份子個數是不是大于106，由于只要大于106能力獲得合適統計成果的數據;

　　(2)因分手通道尺寸削減，天然前進了單元柱長的效力，可是總長度的削減可以或許使總分手效力遠低于慣例儀器;

　　(3)對品德敏感型檢測器，顛末分手柱后單元時候內到達檢測器的份子個數是不是知足檢測道理所請求的最小數量;

　　(4)對濃度型檢測器，到達檢測池的份子數量是不是能知足合適統計紀律的份子數量;

　　(5)檢測微區內的外加能量密度是不是跨越被檢測份子所能蒙受的極限;

　　(6)微量活動相的保送與節制;

　　(7)因資料尺寸的削減，外表層氧化或侵蝕對器件功效的影響。最初，色譜儀器微型化所帶來的益處不只僅是單元長度分手效力的前進，而是總分手能力的堅持乃至前進;不只僅是分手體系或某個部件的微型化，而是全體的微型化;不只僅是品德活絡度的前進，而是濃度活絡度的堅持或前進;不只僅是能量和物資的低耗損，而是操縱的便利和友愛;不只僅是全體尺寸的削減，更首要的是零件的不變性和靠得住性的前進!

　　上面別離會商上述7個題目。

　　(1)色譜分手的根基道理是有合適統計紀律數量的份子群顛末不時的兩相分派和份子碰撞，操縱其分派系數的差別來到達分手的方針。這是一個微觀參數。當份子數量低于這個數量時，就會偏離統計紀律而呈現所謂的漲落景象。份子數量越少，漲落景象越嚴峻。當份子數量低于103個時，已不精確的色譜保留紀律，是以也就落空了微觀意思下的分手紀律。普通地，保障合適統計紀律的份子數量是106個。

　　比方內徑30μm的添補毛細管液相色譜(μ2HPLC)柱或毛細管電泳柱，若別離堅持10萬/m和40萬/m的分手柱效，間接進樣時不過載的進樣量別離為40pL(1pL=10-12L)和115pL，份子總數別離是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012。樣品中含量低至1～0.01μL/L(對μ2HPLC)或低至20～0.2μL/L(對CE)的組分就不能知足106個份子的數量請求，分手進程中就會呈現上述題目。以是，上述分手體系對濃度高于這個方針的樣品分手時可以或許有反復的保留時候。若是斟酌檢測方面的限定[參見下述的(3)和(4)>，痕量闡發頂用粗內徑的添補色譜柱老是優于微型色譜柱。

　　為了能停止痕量闡發，微型分手闡發體系常常接納樣品預稀釋手藝以填補濃度活絡度的缺乏。但為此而成長的手藝也一樣合用于慣例分手闡發體系，一樣可以或許前進慣例儀器的活絡度，除非樣品量遭到嚴酷限定。

　　(2)45年前的色譜柱現實已指出，毛細管啟齒柱的內徑越小，或添補柱的填料粒度越小，色譜柱的分手效力就越高。毛細管電泳亦然，只是現實上有些差別，若有散熱題目和塞子流型的特色。微型化中遍及接納的細內徑分手柱并不是微型儀器的專利，所能到達的高柱效也不是比來才熟悉到的。若是在現有慣例儀器中操縱這類等效內徑的色譜柱，再恰當改良進樣手藝和檢測器，就會有與微型色譜或芯片電泳一樣的單元柱長的柱效，同時還可以或許有極高的總分手效力，由于慣例儀器平分手柱的長度很少受限，而高的分手效力才是真正成心思的。以是，微型色譜和芯片毛細管電泳用短分手柱而有疾速分手的特色，并不是它真實的長處，由于用一樣尺寸的分手柱可以或許別離在慣例色譜和毛細管電泳上完成一樣的結果。用現有的思惟形式來停止的色譜儀器微型化，導致了操縱短分手柱，并且一切的操縱例子都是用極簡略的樣品，這是由于如許的微型化儀器的總分手效力太低。

　　(3)品德型檢測器的呼應值與單元時候內進入檢測器的樣品份子數成反比。分手柱的樣品容量與柱內徑的3次方(毛細管啟齒柱)或平方(添補柱)成反比。比方氣相色譜FID檢測器，用內徑50μm的毛細管柱只能闡發樣品中含量為011%(1000ppm)以上的組分;而用內徑530μm的毛細管柱能闡發樣品中含量為3×10-7(013ppm)以上濃度的組分，相差3000倍。固然細內徑色譜柱的譜帶寬度(表現為色譜峰寬度)比粗內徑色譜柱的窄，能增添單元時候內的份子數量，但它是與柱徑的平方根(實質上是柱效的平方根干系)成反比;與柱容量的削減比，依然虧215次方。離子化檢測器和熒光檢測器都是品德型的，離子化效力普通在10-5～10-3，熒光產率普通在10-3，以是單元時候內進入檢測器的份子數量必須大于50×103～50×105，詳細數值取決于檢測器的機能。用濃度型檢測器會極大地改良這類 狀態，由于呼應值首要與方針組分的濃度有關，出格的品德型檢測器，如具備單份子檢測能力的激光引誘熒光檢測器和熱透鏡檢測器等，已用于CE和μ2HPLC。可是他們相對不是微型化的裝備，也不是一臺色譜儀或電泳儀的價錢所能買到的。在痕量闡發中，用間接進樣體例和品德型檢測器時，慣例色譜老是優于微型色譜。

　　(4)從微觀上講，濃度型檢測器的呼應值與進入檢測池內樣品份子的總數有關，而只與樣品份子和活動相份子數的比值有關。比方，用50μm和530μm內徑的毛細管柱和池體積為012μL的熱導檢測器(μ2TCD)檢測，最小檢出濃度別離為2×10-5(體積分數)和2×10-6(體積分數)，僅差10倍。爾后者單元時候內進入檢測池中的份子數量比前者多3×103倍。以是微型色譜和微型活動闡發儀器頂用濃度型檢測器有益。可是這個現實是無限度的。如在CE和μ2HPLC中，當分手柱內徑≤75μm、塔板高度≤10μm時，請求檢測池體積在nL級(10-8～10-9L)，用接收光譜檢測器(濃度型檢測器)時，上述現實不再建立。由于從微觀看，檢測的道理是操縱樣品份子的某種特征，當份子數量不知足檢測道理所請求的統計數量時，表現為噪聲旌旗燈號。以是在上述的微型分手體系中，最小檢出濃度是很高的，遠不如慣例分手體系的低。

　　就檢測器自身而言，微型化會影響它的呼應活絡度。如氣相色譜用的熱導檢測器，由于給定氣體的熱導率與通道的壁間距(d)有關，出格是在d≤015mm時，熱導率隨d的減小而呈多少增添，是以微型化使熱導檢測器的活絡度有大幅度前進。以是，微型化研討應挑選那些在道理上有益于堅持或前進活絡度的檢測器，或研討那些有極高檢測活絡度的檢測器微型化題目，如激光引誘熒光檢測器。

　　(5)檢測微區內的外加能量題目。任何檢測道理和手藝都是依靠樣品份子與外加能量的彼此感化而發生的物理旌旗燈號。由于檢測微區到達μm級，而感化到微區的光或電磁波強度常常比慣例檢測器高幾倍到幾萬倍，以此填補因樣品份子數削減而喪失的旌旗燈號2噪聲比值。比方，接收光譜檢測器或熒光光譜檢測器等慣例檢測器的光斑直徑在500～1000μm，而μ2HPLC或μ2CE的檢測器光斑直徑唯一30μm，乃至5μm，但所用的光源功率常常是不異的，顛末聚焦，到達檢測區的光強度前進了3個數量級乃至更高。在如許小的微區內，如斯高的光強度會發生以下題目:液體汽化、熒光物資“漂白”、被檢測份子變性、呼應非線性等。

　　(6)微量活動相的保送與節制。在儀器的微型化中，由于氣相色譜的載氣流量以10mL/min到011mL/min計，液相色譜活動相流量以50μL/min到0105μL/min計。出格是液相色譜儀的微流量輸液泵，更是微型化的關頭困難。用分流的方式處理用慣例裝配完成微流量調控只是百年大計;一樣，經由進程改裝慣例檢測器來順應微型儀器也是很牽強的。比方，由于靜態密封的微滲漏，現有的機器/電子式氣體流量節制閥幾近不能對1mL/min的流量有1%的節制精度;現有的液相高壓輸液體系也不能對015μL/min的流量有3%的節制精度。而上述精度都是微型色譜儀所須要的。以是，只要從道理上、資料上、手藝工藝上和工程上都從頭研討和設想，能力有真正意思上的微型化。

　　(7)因所用資料品德的細小，外表層氧化或侵蝕對器件功效的影響弘遠于慣例色譜儀器。比方熱導檢測器(TCD)中的敏感熱絲，慣例的直徑在100μm，而微型化的熱敏層厚度唯一幾個μm乃至1μm，以是必須處理熱敏層老化或侵蝕的困難。再比方微型化的電化學檢測器，電極厚度在10-1μm量級，而慣例的在102μm量級，二者相差幾百倍。以是，微型化的器件必須處理耐侵蝕和老化題目，能力成為適用化的器件，而不只僅是展品或樣機。

　　另外，對二維分手體系，分手效力決不是簡略的第1根柱效(N1)×第2根柱效(N2)，而是與柱的挑選性有間接干系。當某一對組分在此中一維上不能到達完全分手時，常常在另外一維上的分手度也為零。以是真正成心思的二維分手體系必須是:同系列化合物的方針組分對必須在某一維上到達完全分手，而差別維擔任分手差別族化合物的使命。

　　在設想構想上，微型化不只是簡略尺寸的削減，其實質上的前進是在處理道感性困難的進程中不時的立異。

　　不管從迷信上仍是適用上，單方面尋求分手體系的細小化而輕忽檢測活絡度和檢測濃度規模的題目;尋求單元柱長分手效力的前進和疾速檢測而輕忽現實樣品分手對總柱效的請求;尋求進樣區和分手柱的細小化而輕忽其可操縱性和檢測裝備的微型化，是今朝微型化研討的誤區。從計謀上講，全體微型化的難點題目是闡發化學微型化成長的根基困難，固然偶然處理這些題目不是闡發化學學科范疇的事，可是由于其余學科不碰到這類題目，導致這些題目成為游離于一切學科的、可是又須要多學科穿插能力處理的迷信和手藝困難。以是，微型化不是簡略的闡發化學題目，而是闡發化學與資料學、流體力學、電磁學、微加工手藝和工藝、電子學、生化和無機化學等學科的穿插，是可以或許在實質上鞭策闡發化學成長的年青的學科。