操縱各類化學物資所具備的發射、接收或散射光譜譜系的特色，來肯定其性子、布局或含量的手藝，稱為光譜闡發手藝。根據光譜譜系的特色差別，可把光譜闡發手藝分為發射光譜闡發、接收光譜闡發和散射光譜闡發三大類。在臨床生歸天學查驗中，光譜闡發是一類非常主要的手藝，利用極其普遍。

　　I.光譜闡發法(photometry)

　　1.界說：根據物資接收、發射或散射輻射能而成立起來的一類闡發方式。

　　2.光的根基性子：高速傳布的電磁輻射;

　　具備動搖性(l=c/v)和微粒性(E=hv);短波能量大，長波能量小

　　3.物資對光接收的根基道理：

　　能量轉移----當光輻射經由進程某種物資時，構成該物資的份子與光子發生“碰撞”，光子的能量就轉移至份子、原子上，使它們由基態(低能態)躍遷到激起態(高能態)，這類躍遷稱為激起。

　　挑選接收----構成物資的份子僅接收與其內能變更(基態與激起態能量差)絕對應的波長或頻次的光，所取得的光譜稱為接收光譜。

　　能量開釋----處于較高能態的份子(激起態份子)不不變，當其前往基態時，以熱或發射光譜的情勢將能量開釋出來。所發射出的響應光譜，稱份子發射光譜。

　　4.分類

　　(1)接收光譜闡發法：根據溶液能接收由光源收回的某些波長的光后所構成的特色光譜來判定該物資的性子和含量的方式。

　　(可見、紫外分光光度法(visibleandultravioletspectrophotometry)原子接收光譜法(atomicabsorptionspectrophotometry)：微量金屬元素紅外分光光度法)

　　(2)發射光譜闡發法：根據物資遭到熱能或電能等的激起后所發射出的特色光譜來停止定性及定量闡發的一種方式。

　　(火焰發射光譜法(flameemissionphotometry)：堿金屬/堿土金屬元素熒光光譜法(fluorometry)：少許無機物、酶活氣、激素等)

　　(3)比濁/散射光譜闡發法：測定光芒經由進程溶液混懸顆粒后的光接收或光散射水平的一類定量方式。

　　比濁法(turbidimetry)：在光源的光路方向上測定透射光強度(透射光&散射光)與入射光強度的比值和膠體溶液中質點濃度間的干系。

　　散射測濁法(nephelometry)：在光路的垂直方向上丈量散射光強度和膠體溶液中質點間的干系。

　　5.特色：活絡度高;測定簡潔、疾速;試樣不被粉碎等。

　　II.可見、紫外分光光度法

　　1.界說：根據物資份子對200nm~700nm光區電磁輻射的接收特征停止闡發的方式。

　　可見光：400~700nm,有色物資溶液

　　紫外光：200~400nm,無色物資

　　2.特色：活絡度高(10-4~10-7g/ml);挑選性強;切確度和精確度高;儀器裝備簡略，操縱易把握

　　3.接收光譜

　　(1)光譜的發生：化合物份子的價電子躍遷

　　(2)接收光譜曲線：電子躍遷的接收波長和接收強度可用儀器測定，在可見、紫外光區內繪制或掃描取得一條以波長(l)為橫坐標,吸光度(A)為縱坐標的接收曲線。

　　4.光接收的根基定律(Lamber-Beer’sLaw)

　　(1)定律：單色光經由進程吸光溶液后，吸光度與濃度或厚度之間呈反比干系。

　　Lamber定律：申明接收與厚度間的干系

　　Beer定律：申明接收與濃度間的干系

　　(2)抒發式：

　　*a為吸光系數(absorptivity),即吸光物資在單元濃度及單元厚度時的吸光度。

　　b為液層厚度

　　c為溶液濃度(concentration)

　　5.比色法(colorimetry)

　　(1)界說：用可見光作光源，比擬溶液的色彩深淺度以測定所含有色物資濃度的方式

　　(2)所用儀器：分光光度計(spectrophotometer)

　　(i)根基道理：溶液中的物資在光的照耀激起下，發生了對光接收的效應，物資對光的接收是具備挑選性的。各類差別的物資都具備其各自的接收光譜，故當某單色光經由進程溶液時，其能量就會被接收而削弱，光能量削弱的水平和物資的濃度有必然的比例干系。

　　(ii)布局構成(以722分光光度計為例)

　　光源：可見光區的光源為鎢燈，波長規模是320~1000nm。

　　(紫外光區的光源為氫燈或氘燈，波長是200~320nm)

　　單色器：一種將光源發生的夾雜光分化為單一波長的光學系統。普通是根據經由進程棱鏡的折射或光柵的衍射而取得的。

　　試樣室：由比色皿座架及光門構成。可見光區用光學玻璃比色皿(紫外光區用石英比色皿)

　　光電管暗盒：由光電管(可將光能改變為能夠縮小檢測和記實的電能)和微電流縮小器構成。

　　顯現器：由縮小器和讀數元件構成。

　　(3)比色法的定量方式：

　　(i)規范曲線法：將一系列濃度差別的規范溶液根據必然操縱進程顯色后，別離測吸光度(A)，以A為縱坐標，濃度為橫坐標制規范曲線(最少要5點)。在不異前提下處置待測物資并測定其吸光度，便可從規范曲線找出絕對應的濃度。

　　(ii)對照法：將規范品與待測樣品在不異前提下顯色并測定各自的吸光度。因為測定系統溫度、厚度及入射光波長分歧，故規范與待測樣品a&b值相稱，可用下式比擬計較待測樣品濃度Cx=Cs´As/Ax。