第一步：挑選抗體。

　　三種二抗抗體：Whole IgG，F(ab&;rsquo;)2片斷，Fab片斷。

　　Whole IgG抗體合用于大都環境，是性價比最高的。Whole IgG是完全的抗體份子，有一個Fc局部和兩個與抗原連系的Fab局部 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc網站)。

　　F(ab&;rsquo;)2片斷抗體是胃卵白酶消化IgG撤除Fc局部，剩下靠二硫鍵毗連的連系抗原的兩個Fab局部。F(ab&;rsquo;)2片斷抗體用在防止抗體與Protain A 或G連系，或與有Fc受體的活細胞連系。若是一抗是完全的抗體份子，不論二抗是哪一種情勢都能夠連系Fc受體。

　　Fab片斷抗體是用木瓜卵白酶消化IgG后獲得的。這些抗體只含有一個Fab連系位點。它們用來封鎖內源性的免疫球卵白，或在利用不異物種來歷的一抗多標記的嘗試中封鎖裸露的免疫球卵白。

　　第二步：一抗的物種來歷。

　　為了準確的挑選二抗，必須曉得一抗的物種來歷。若是一抗是小鼠來歷的，就找&;ldquo;anti-mouse&;rdquo;。

　　第三步：挑選二抗的物種來歷。

　　第四步：挑選二抗的特同性。

　　由于差別物種來歷的免疫球卵白含有類似的布局，抗一個物種的抗體能夠與其余物種產生穿插反映，除非事前出格處置過(如標有&;ldquo;min X Hu, Bov&;hellip;Sr Prot&;rdquo; - minimal cross-reactivity to human and bovine serum proteins) ), 顛末用圓括號中的物種 (human, bovine) 的血清卵白的吸附處置來下降穿插反映)。在挑選二抗時，只要在來自兩個很附近的物種的一抗都存在而須要檢測此中一種時，才利用針對此中一種出格吸附處置過的抗體。如許的抗體能夠不能和一切亞型的IgG都很好的反映。比方，在含有內源性免疫球卵白的大鼠的構造樣本中，利用針對大鼠吸附處置過的anti-mouse IgG來檢測小鼠的一抗，或在多標記嘗試中利用了大鼠的一抗時。當不含有大鼠免疫球卵白時，最好接納不針對大鼠IgG處置過的anti-mouse二抗來檢測小鼠的一抗。牛血潔白卵白(BSA)和奶粉中能夠含有牛IgG。間接針對牛，山羊，馬和綿羊的二抗會跟牛IgG反映。是以，利用BSA或奶粉來封鎖或濃縮這些抗體能夠致使背景染色較著增添，和抗體效價的下降。這時候，保舉利用5%的二抗來歷物種的一般血清來封鎖。

　　Anti-IgG (H+L)這類抗體和IgG份子的重鏈和輕鏈[比方Fc和F(ab&;rsquo;)2/Fab局部]都能夠反映。也能夠和其余的免疫球卵白家屬(比方IgM和IgA)反映，由于一切的免疫球卵白都有不異的輕鏈(&;kappa;鏈或&;lambda;鏈)。Anti-IgG (H+L) 比只抗片斷的抗體辨認更多的抗原表位。

　　Anti-IgG，Fc fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc局部反映。它們經由過程了ELISA檢測，和(或)針對Fab片斷吸附的測試。某些環境下，須要額定檢測和處置來下降和IgM或IgA的穿插反映，會被描寫為&;ldquo;Anti-IgG, Fc&;gamma;fragment specific&;rdquo;。注重：不是一切anti-IgG, Fc抗體和一切亞型的IgG反映才能分歧。要找和四種IgG亞類反映才能差未幾的anti-mouse IgG, Fc&;gamma;抗體的話，該當選Goat Anti-Mouse IgG (subclasses 1+2a+2b+3), Fc&;gamma;fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)。

　　Anti-IgG，Fc&;gamma; Subclass specific抗體別離和差別的小鼠IgG亞型重鏈的Fc局部反映。這類抗體顛末ELISA和/或針對Fab片斷、IgM和其余小鼠IgG亞型的吸附測試。

　　Anti-IgG，F(ab&;rsquo;)2 fragment specific和IgG的F(ab&;rsquo;)2/Fab局部反映。這類抗體顛末了ELISA和/或Fc片斷的吸附檢測。由于和輕鏈反映，它們同時也和具備不異輕鏈的其余品種的免疫球卵白反映(如IgM和IgA)。

　　(min X&;hellip;Sr Prot)這類抗體顛末了檢測，和針對IgG和圓括號中的物種的血清卵白的吸附處置。當其余物種免疫球卵白的呈現能夠致使穿插反映時，保舉利用這類抗體。可是，當要挑選顛末針對附近物種吸附處置的抗體時，要出格注重，由于它們能辨認的表位數量大大減小了，能夠辨認單抗的才能很弱。這類環境的例子有Anti-Mouse IgG (min X Rat,&;hellip;.Sr Prot), Anti-Rat IgG (min X Mouse, &;hellip;Sr Prot), 和 Anti-Ramenian Hamster IgG (min X Mouse, Rat, &;hellip;Sr Prot)。

　　ML (Multiple Labeling多標記嘗試): 有些抗體表明了ML，來夸大它們除能夠用于單標，還可用于多標記嘗試。

　　第五步：挑選須要的探針。

　　第六步：挑選的抗體的規格、代價和目次號。