轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種特地手藝。跟著基因與卵白功效研討的深切，轉染今朝已成為嘗試室任務中經常觸及的根基方式。轉染大抵可分為物理介導、化學介導和生物介導三類路子。電穿孔法、顯微打針和基因槍屬于經由過程物理方式將基因導入細胞的典范;化學介導方式良多，如典范的磷酸鈣共積淀法、脂質體轉染方式、和多種陽離子物資介導的手藝;生物介導方式，有較為原始的原生質體轉染，和此刻比擬多見的各類病毒介導的轉染手藝。

　　抱負細胞轉染方式，應當具備轉染效力高、細胞毒性小等長處。病毒介導的轉染手藝，是今朝轉染效力最高的方式，同時具備細胞毒性很低的上風。可是，病毒轉染方式的籌辦法式龐雜，經常對細胞范例有很強的挑選性，在普通嘗試室中很難提高。別的物理和化學介導的轉染方式，則各有其特色。

　　須要指出的一點，不管接納哪一種轉染手藝，要取得最優的轉染成果，能夠都須要對轉染前提停止優化。影響轉染效力的身分良多，從細胞范例、細胞培育前提和細胞發展狀況，到轉染方式的操縱細節，都須要斟酌。

　　一、細胞傳代

　　1.嘗試籌辦：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，暗號筆，培育皿，離心管。

　　2.棄掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗濯兩次。

　　3.用Tip頭插手1mlTrypsin液，消化1分鐘(37℃，5%CO2)。用手輕拍培育瓶壁，察看到細胞完整從壁上零落上去為止。

　　4.插手1ml的含血清培育基停止反映。

　　5.用Tip頭屢次吹吸，使細胞完整分離開。

　　6.將培育液裝入離心管中，1000rpm離心5min。

　　7.用培育液重懸細胞，細胞計數后挑選0.8X106個細胞插手一個35mm培育皿。

　　8.將適合體積完整培育液插手離心管中，混勻細胞后悄悄插手培育皿中，使其平均散布。

　　9.將培育皿轉入CO2培育箱中培育，第二天轉染。

　　二、細胞轉染

　　1.轉染試劑的籌辦

　　①將400ul去核酸酶水插手管中，震動10秒鐘，消融脂狀物。

　　②震動后將試劑放在-20攝氏度保管，利用前還需震動。

　　2.挑選適合的夾雜比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA品德)來轉染細胞。在一個轉染管中插手適合體積的無血清培育基。插手適合品德的MyoD或EGFP的DNA，震動后在插手適合體積的轉染試劑，再次震動。

　　3.將夾雜液在室溫安排10―15分鐘。

　　4.吸去培育板中的培育基，用PBS或無血清培育基洗濯一次。

　　5.插手夾雜液，將細胞放回培育箱中培育一個小時。

　　6.到時后，根據細胞品種決議是不是移除夾雜液，以后插手完整培育基持續培育24-48小時。

　　三、第二次細胞傳代

　　1.在轉染后24小時，察看嘗試成果并記實綠色熒光卵白抒發環境。

　　2.再次停止細胞傳代，根據免疫染色適合的密度0.8X105個細胞/35mm培育皿將細胞從頭轉入培育皿中。

　　3.在一般前提下培育24小時后根據染色請求前提牢固。