1簡介

　　飼料中黃霉素查驗的高效液相色譜法測定方式。

　　本規范合用于飼料中黃霉素的測定，利用儀器501高效液相色譜儀。

　　2規范性援用文件

　　以下文件對本文件的利用是必不可少的。但凡注日期的援用文件，僅所注日期的版本合用于本文件。但凡不注日期的援用文件，其最新版本(包含一切的點竄單)合用于本文件。

　　GB/T6682闡發嘗試室用水規格和嘗試方式

　　GB/T14699.1飼料采樣

　　3試樣制備

　　按GB/T14699.1抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取約200g，破壞至過0.45mm孔徑

　　的闡發篩，混勻，裝入磨口瓶中備用。

　　4道理

　　飼料中黃霉素經50%的甲醇提取后，用pH6.0磷酸鹽緩沖液濃縮至所需濃度，反相色譜柱停止分手，UV501紫外檢測器檢測，外標法定量。

　　5試劑和溶液

　　5.1除非還有申明，本法所用試劑均為闡發純，水為適合GB/T6682二級水的劃定。

　　5.2黃霉素對比品：純度100%。

　　5.3黃霉素儲蓄液：緊密稱取黃霉素對比品恰當，用甲醇配制成1mg/mL，作為規范儲蓄溶(儲存4℃冰箱保管10天)。

　　5.4黃霉素規范任務液：量取恰當黃霉素儲蓄液，用pH6.0磷酸鹽緩沖液濃縮成濃度為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50μg/mL的系列規范任務液(4℃保管7天)。

　　5.5甲醇：色譜純。

　　5.6乙腈：色譜純。

　　5.7甲酸銨。

　　5.8磷酸。

　　5.9pH6.0磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使消融成1000mL，即得。

　　6儀器裝備

　　6.1501高效液相色譜儀(配紫外檢測器)。

　　6.2飼料破壞機。

　　6.3闡發天平，感量0.0001g，0.001g。

　　7測定步驟

　　7.1試樣提取

　　稱取破壞后的飼料樣品5g(切確至0.001g)，插手50.0mL50%甲醇溶液提取后，過濾，濾

　　液用磷酸鹽緩沖液pH6.0濃縮至所需的恰當濃度，經0.45μm濾膜過濾后供高效液相色譜儀闡發。

　　7.2色譜前提

　　色譜柱：(4.6×150mm，5μm)或機能相稱的色譜柱。

　　流速：0.7mL/min。

　　檢測波長：258nm。

　　進樣量：20μL。

　　活動相：乙腈:0.2%甲酸銨水溶液=45:55(用10%磷酸調理至pH4.9)

　　7.3上機測定

　　取規范任務液和樣品試液別離注入液相色譜儀，記實譜圖，按外標法以峰面積停止計較。

　　8成果計較

　　根據下式計較試樣中藥物的含量：

　　X=A×Cs×V×1000/As×m×1000×n

　　式中：

　　X——試樣中藥物的含量，單元為毫克每公斤(mg/kg);

　　A——應的色譜峰面積呼應值;

　　As——規范溶液對應的色譜峰面積呼應值;

　　V——定容體積，單元為毫升(mL);

　　Cs——規范溶液的濃度，單元為微克每毫升(μg/mL);

　　m——試樣品德，單元為克(g);

　　n——濃縮倍數。

　　平行測定成果用算術均勻值表現，成果保留3位有用數字。

　　9檢測方式活絡度、精確度、緊密度

　　9.1活絡度

　　本方式的檢測限為0.5mg/kg。

　　9.2精確度

　　本方式增添濃度1.0mg/kg，收受接管率為80%～120%。9.3

　　緊密度

　　本方式的批內變異系數CV≤10%，批間變異系數CV≤15%。