媒介

　　本規范附錄A為材料性附錄。

　　本規范由浙江省陸地與漁業局提出并歸口。

　　本規范草擬單元：農業部漁業情況及水產物質檢中間(舟山)。

　　本規范首要草擬人：鄭斌、陳雪昌、劉士忠、金彩杏、鐘志、劉琴。

　　水產物中磺胺類殘留量的測定液相色譜法

　　規模

　　本規范劃定了水產物中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的液相色譜測定方式。

　　本規范合用于水產物中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的測定，別的磺胺類藥物的測定能夠參照本規范。

　　規范性援用文件

　　以下文件中的條目經由過程本規范的援用而成為本規范的條目。但凡注日期的援用文件，其隨后一切的點竄單(不包含訂正的內容)或訂正版均不合用于本規范，但是，鼓動勉勵按照本規范告竣和談的各方研討是不是可以利用這些文件的最新版本。但凡不注日期的援用文件，其最新版本合用于本規范。

　　GB/T6682闡發嘗試室用水規格和嘗試方式

　　道理

　　用乙酸乙酯提取，稀鹽酸反提取，正己烷脫脂，熒光胺衍生，反相色譜柱分手，熒光檢測器檢測，磺胺5-甲氧嘧啶為內標物，內標法定量。

　　試劑

　　本規范所用試劑在磺胺類藥物出峰處應無攪擾峰，嘗試用水應合適GB/T6682中一級水規范。

　　規范品：磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑，磺胺5-甲氧嘧啶，純度均大于98.0%。

　　丙酮：色譜純。

　　正己烷：色譜純。

　　乙酸乙酯：色譜純。

　　乙腈：色譜純。

　　甲醇：色譜純。

　　熒光胺：純度大于99.0%。

　　乙酸鈉：闡發純。

　　冰乙酸：優級純。

　　鹽酸溶液：2mol/L，量取180mL鹽酸，加適當水并濃縮至1000mL。

　　乙酸鈉溶液：3.5mol/L，稱取28.7g無水乙酸鈉溶于蒸餾水中，定容至100mL。

　　熒光胺溶液：2mg/L，稱取0.03g熒光胺，加15mL丙酮，振搖至完整消融，寄存在暗處。現配現用。

　　規范儲蓄液：100mg/L，稱取規范品10mg(稱準至0.1mg)，用甲醇消融并定容至100mL。避光冷藏保管，保管期為一個月。

　　夾雜規范中間液：1mg/L，移取規范儲蓄液各1.00mL，用甲醇濃縮并定容至100mL，在室溫下混勻。

　　內標儲蓄液：100mg/L，稱取磺胺5-甲氧嘧啶規范品10mg(稱準至0.1mg)，用甲醇消融并定容至100mL。避光冷藏保管，保管期為一個月。

　　內標中間液：1mg/L，移取內標儲蓄液1.00mL，用甲醇濃縮并定容至100mL，在室溫下混勻。

　　夾雜規范利用液：取夾雜規范中間液20μL、40μL、100μL、200μL、400μL，別離插手內標中間液100μL，用2mol/L鹽酸(4.10)濃縮至2mL，配成濃度別離為0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L的夾雜規范利用液，此中內標濃度為0.05mg/L。

　　儀器與裝備

　　液相色譜儀：配熒光檢測器。

　　電子天平：感量0.0001g。

　　電子天平：感量0.01g。

　　高速構造搗碎機。

　　均質機。

　　離心計心情。

　　漩渦混勻器。

　　氮吹儀。

　　來去式振蕩器。

　　聚丙烯離心管：15mL、50mL。

　　容量瓶：10mL、20mL、50mL、100mL、200mL、500mL、1000mL。

　　玻璃移液管：1mL、2mL、5mL、10mL。

　　巴斯德吸管。

　　色譜前提

　　色譜柱：ODS-C18，5μm，4.6mm×250mm，或同類型號色譜柱。

　　柱溫：45℃。

　　活動相：乙腈 乙酸溶液(38 62)，500mL水中插手冰乙酸調理pH至3.0配制成乙酸溶液。

　　流速：1mL/min

　　進樣量：20μL。

　　激起波長：405nm。

　　發射波長：495nm。

　　步驟闡發

　　樣品制備

　　從原始樣品中掏出局部有代表性的樣品，高速構造搗碎機搗碎。四分法縮分出不少于500g樣品，混勻，均分紅兩份。裝入潔凈容器，加封，表明標記。-18℃以下冷凍保管。

　　提取

　　將樣品凍結，稱取2.00g，置于50mL聚丙烯離心管，插手磺胺5-甲氧嘧啶規范中間液(4.16)100μL，用玻璃棒攪勻，再加乙酸乙酯10mL，均質機14000rpm均質1min，來去式振蕩器振動10min，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層謹慎轉移到15mL具塞刻度試管中，40℃以下氮氣吹至2mL。再向原離心管中插手乙酸乙酯10mL，漩渦混勻30s，振動10min，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層謹慎轉移到原15mL具塞刻度試管中，40℃以下氮氣吹至5mL。而后在試管中插手2.00mL2mol/L的鹽酸溶液，漩渦混勻1min，加蓋后振動10min，3000rpm離心8min，用巴斯德吸管移去乙酸乙酯層，在余液中插手正己烷5mL，漩渦混勻30s，3000rpm離心8min，用巴斯德吸管移去正己烷層，0.45μm微孔濾膜過濾，濾液備用。

　　衍生

　　向樣品瓶中插手200μL夾雜規范利用液或樣品提取液、200μL乙酸鈉溶液和80μL熒光胺溶液，漩渦混勻30s，20min后供液相色譜闡發。

　　色譜闡發

　　取衍生后的樣品提取液20μL進樣，記實峰面積，呼應值均應在儀器檢測的線性規模以內。按照規范樣品的保留時候定性，內標法定量。磺胺類藥物色譜闡發圖參見附錄A。

　　任務曲線

　　稱取空缺樣品2.00g，別離增添夾雜規范中間液(4.14)20μL、40μL、100μL、200μL、400μL，樣品中每種磺胺殘留量別離為0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg，按7.2、7.3、7.4操縱，以磺胺峰面積與內標物峰面積的比值為縱坐標，磺胺含量為橫坐標，繪制任務曲線。

　　計較

　　用色譜數據處置軟件或按下式計較樣品中磺胺殘留量：

　　式中：

　　X——樣品中磺胺殘留量，單元為毫克每公斤(mg/kg);

　　s——樣品溶液中磺胺峰面積，單元為counts;

　　s1——樣品溶液中內標峰面積，單元為counts;

　　S——規范溶液中磺胺峰面積，單元為counts;

　　S1——規范溶液中內標峰面積，單元為counts;

　　x——加標樣品中磺胺殘留量，單元為毫克每公斤(mg/kg)。

　　方式收受接管率

　　濃度規模為0.010mg/kg～0.10mg/kg時，收受接管率見收受接管率表。

　　收受接管率表

　　稱號

　　收受接管率

　　磺胺嘧啶

　　88.0%～111.8%

　　磺胺甲基嘧啶

　　90.0%～110.8%

　　磺胺二甲基嘧啶

　　91.0%～110.1%

　　磺胺甲基異噁唑

　　107.0%～116.7%

　　方式檢出限

　　本方式檢出限為0.010mg/kg。

　　精密度

　　在反復性前提下取得的兩次自力測定成果的相對差值不得跨越算術均勻值的15%。