高效液相色譜..串連質譜法檢測中藥材中無機磷農藥殘留量

　　擇要:研討了中藥材中無機磷農藥殘留量的高效液相色譜..串連質譜同步檢測體例。接納CAPCELLPAKMGC18反相柱,以乙腈為提取溶液,以Carb/PSA柱為污染柱,液相色譜..串連質譜儀測定。體例線性規模為10~500..g/L,11種無機磷農藥在此規模內線性杰出,相干系數為0..9961~0..9999。在10~100..g/kg濃度規模內,加標收受接管率在70%~110%之間,絕對規范誤差為1..4%~11%,最低檢出限為2~20..g/kg,合適殘留檢測闡發請求。

　　關頭詞:高效液相色譜..串連質譜;中藥材;無機磷農藥;多農藥殘留

　　無機磷農藥大批操縱會在農作物中發生積蓄，感化,對人畜組成要挾,也會對情況發生負面影響。今朝,我國中藥材中無機磷農藥殘留闡發研討，較少[1~3],操縱較多的檢測體例為氣相色譜法[4],，也有操縱氣質聯用法[5],但較少操縱液質聯用法。因為大大都中藥材成份龐雜,對龐雜樣品多殘留痕量闡發,氣相色譜和藹質連用抗攪擾才能較差,對樣品前處置手藝請求較高,而高效液相色譜..串連質譜儀能夠停止二級質譜闡發,抗攪擾才能較強,對前處置請求較低。經由進程挑選監測離子對一些成份龐雜、背景較..臟..的樣品停止精確的定性和定量闡發,比擬合適中藥材中農藥多殘留檢測闡發。本研討接納固相萃取污染連系高效液相色譜.串連質譜檢測的體例成立了梔子、玄參、車前草、甘草及金銀花等中藥材中11種無機磷農藥的多殘。

　　檢測體例

　　1..嘗試局部

　　1..儀器與資料

　　液相色譜..三重四極桿質譜聯用儀;粉粹機;臺式，離心計心情(最高轉速4500r/min);超聲波洗濯器;氮氣吹干儀;扭轉蒸發儀;漩渦夾雜器;固相萃，取儀。甲醇和乙腈均為色譜純;甲苯、丙酮、無水硫酸，鈉為闡發純;甲酸:純度>98%;活性炭;Carb/PSA雙層固相萃取柱(500mgCarb/500mgPSA/6mL)。規范品:敵敵畏;地蟲硫磷;殺撲磷;二嗪磷;甲基嘧啶磷;甲基谷硫磷;馬拉硫磷;毒死蜱;毒蟲畏;伏殺硫磷;乙硫磷。丙酮配制規范儲蓄溶液(100mg/L)。嘗試藥材:梔子、玄參、車前草、甘草及金銀花。

　　2..樣品提取

　　稱取破壞、過0..45mm篩后的中藥材樣品5..0g于50mL塑料離心管中,插手30mL乙腈,插手5g無水硫酸鈉,蓋上蓋子,用手猛烈震動使其夾雜均勻,超聲30min,3500r/min離心5min,取15mL上清液于100mL梨形瓶中,35..下扭轉蒸發至干,待污染。

　　3..樣品污染

　　在Carb/PSA柱中插手0..5g活性炭,事后用4mL乙腈..甲苯(體積比為3:1)活化小柱,用10mL

　　乙腈..甲苯(體積比為3:1)分三次消融蒸干后殘過柱,搜集流出液,用20mL乙腈..甲苯(體積比為3:1)洗脫,搜集流出液,歸并流出液于平底燒中,35..下扭轉蒸發至0..5mL擺布,氮氣吹干,用1mL乙腈消融,過0..22..m濾膜后測定。

　　1..4..液相色譜前提

　　色譜柱:CAPCELLPAKMGC18柱(100mm.2..0mm.id.,3..m);柱溫:室溫;流速:200..L/min;進樣體積:10..L;活動相:V(0..1%甲酸水溶液):V(甲醇)=50:50,0~3min甲醇比例從50%線性增添至95%,而后堅持4..5min,7..5~8min,線性規復至初始活動比擬例,而后均衡2min。

　　1..5..質譜闡發前提

　　離子源:電噴霧離子化源(ESI);掃描形式:正離子形式;檢測體例:挑選反映檢測(SRM);電噴霧電壓:4000V;毛細管溫度:350..;碰撞氣:高純度氬氣;監測離子及對碰撞能量見表1。表1..ESI..MS/MS監測離子及對應碰撞能量無機磷農藥母離子

　　1..6..線性干系考查嘗試精確吸收適當各農藥規范品儲蓄液,用空缺品提取液在10~500..g/L規模內濃縮成一系列差別濃度梯度,在選定的最好液..質分手前提下停止測定,以樣品中各無機磷農藥的峰面積為縱坐標,含量(..g/L)為橫坐標,繪制規范曲線。

　　1..7..收受接管率和精密度嘗試

　　稱取5種中藥材各5..0g,別離在10、50、100g/kg三個濃度下停止空缺樣品加標嘗試,別離按1..3中體例操縱,每一個濃度反復5次,測得均勻收受接管率和精密度。

　　2、成果與會商

　　2..1..色譜前提..

　　液質聯用所用活動相中不能插手各類外表活性劑、難揮發鹽及其余對證譜呼應有按捺感化的物資,活動相可選規模較小,經常使用的為甲醇、乙腈、及其差別比例的夾雜物和一些易揮發性鹽的緩沖液。本研討考查了甲醇..水溶液活動相系統,嘗試進程中插手適當的乙酸銨和甲酸,嘗試成果標明,在甲醇..水溶液中插手0..1%的甲酸有助于無機磷農藥的離子化,呼應值高。同時為了進一步改良峰形,延長闡發時候,接納了梯度洗脫,11種無機磷農藥均在7min以內出峰,峰形杰出,詳見圖1。

　　2..2..質譜前提..

　　在ESI正離子形式下,一切物資均有杰出呼應,可同時察看到其準份子離子峰。在瞄準份子離子停止二次質譜優化時又獲得其碎片離子及各自的碰撞能量,挑選碎片離子作為定性定量根據(見表1),保障了活絡度和精確性。

　　2..3..樣品提取劑..

　　無機磷農藥具備必然極性,差別文獻報道的取溶劑有所差別,本嘗試別離考查了乙酸乙酯、乙腈、丙酮、二氯甲烷和正己烷5種提取溶劑對11種無機磷農藥的提取效力,成果標明,乙腈和二氯甲烷提取效力較高,但二氯甲烷提取的共提物較多,雜質攪擾大,是以嘗試挑選乙腈作為提取溶劑。

　　2..4..污染體例..

　　嘗試別離挑選活性炭、C18、SAX、Carb/PSA固相萃取柱污染,成果標明,Carb/PSA固相萃取柱的污染成果較抱負,并且能夠保障11中無機磷農藥的收受接管率均在70%以上。對色素含量高的樣品,在小柱中插手必然量的活性炭脫色成果更好。

　　2..5..線性干系和最低檢出限..

　　按1..6體例操縱,成果標明,5種中藥材中11種無機磷農藥在10~500..g/L濃度規模內線性干系杰出,梔子、車前草、玄參、甘草及金銀花中11種無機磷農藥的線性相干系數為0..9961~0..9999。在空缺樣品中增添規范品做檢出限嘗試,以信噪比大于3為根據,成立了體例的最低檢出限,五種中藥材中11種無機磷農藥的最低檢出限為2~20..g/kg,詳見表2。

　　2..6..收受接管率和精密度..

　　按1..7體例操縱,測得均勻收受接管率和精密度,成果標明:在10~100..g/kg濃度規模內,梔子中11種無機磷農藥均勻收受接管率為84..0%~104..7%,絕對規范誤差為1..4%~9..4%;車前草中無機磷農藥均勻收受接管率為71..6%~87..8%,絕對規范誤差為2..7%~11%;玄參中無機磷農藥均勻收受接管率為73%~110%,絕對規范誤差為1..8%~7..8%;甘草中無機磷農藥均勻收受接管率為70%~86..5%,絕對規范誤差為3..3%~9..5%;金銀花中無機磷農藥均勻收受接管率為72..5%~96..8%,絕對均勻誤差為2..2%~9..1%。

　　2..7..樣品檢測..

　　操縱本文成立的體例對從6家藥材店買回的，梔子、車前草、玄參、甘草及金銀花等28個樣品停止了檢測,均未檢出無機磷農藥,并將本體例用于出口牛蒡中無機磷農藥殘留量檢測,2009年共檢測牛蒡樣品284個,均未檢出無機磷農藥。