規模

　　本方式劃定了化裝品中4-氨基聯苯及其鹽的液相色譜/串連質譜測定方式。

　　本方式合用于化裝品中4-氨基聯苯及其鹽的測定，其檢測限為1.0µg/kg，定量限為3.3µg/kg。

　　方式撮要

　　樣品中禁用芬芳胺4-氨基聯苯及其鹽，經由過程超聲提取，液液萃取及固相萃取小柱污染并濃縮后，用恰當的無機溶劑定容，經液相色譜/串連質譜測定，之內標法定量。

　　試劑與資料

　　甲醇：色譜純。

　　乙腈：色譜純。

　　甲酸：色譜純。

　　正己烷：闡發純。

　　乙醚：闡發純。

　　氯化鈉飽和溶液。

　　HLB固相萃取小柱或相稱者：500mg/6mL。

　　30%甲醇水溶液：甲醇(3.1) 水=30 70。

　　氨水：NH3含量25%～28%。

　　5%氨水甲醇溶液：氨水(3.9) 甲醇=5 95，現配現用。

　　4-氨基聯苯：CAS92-67-1，純度>99%。

　　4-氨基聯苯-D9：CAS344298-96-0，純度>99%。

　　4-氨基聯苯標準儲備液(1000µg/mL)：切確稱取標準物資10.0mg，用甲醇消融,濃縮，定容至10mL，于-18℃下保管。

　　4-氨基聯苯標準任務溶液：別離取(3.13)標準儲備液，用甲醇濃縮定容，制成濃度為1000ng/mL的標準溶液，于-18℃下保管。臨用時用50%甲醇水溶液濃縮成500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、5ng/mL。

　　4-氨基聯苯-D9內標標準溶液：用50%甲醇濃縮內標標準品溶液，取得100ng/mL4-氨基聯苯-D9內標溶液。

　　別離從4-氨基聯苯標準任務溶液(3.14)中別離吸收0.5mL溶液與0.5mL100ng/mL內標溶液(3.15)夾雜，制得內標4-氨基聯苯-D9濃度為50ng/mL，4-氨基聯苯別離為250ng/mL、125ng/mL、62.5ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、2.5ng/mL的標準溶液。并按照須要配制成響應濃度的空缺基質加標標準溶液。

　　儀器

　　液相色譜-串連質譜檢測器(配ESI離子源)。

　　闡發天平：感量0.1mg。

　　渦旋夾雜器。

　　離心計心情：轉速10000r/min,容量為10mL。

　　樣品過濾器：0.2μmPTFE濾膜或相稱者。

　　闡發步驟

　　5.1化裝水、面霜、粉底類化裝品

　　稱取樣品0.2g(切確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，插手1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再插手3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋夾雜器上使樣品分離，插手3mL乙腈(3.2)，充實渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出基層清液于另外一10mL具塞塑料離心管中，基層氯化鈉飽和溶液用3mL乙腈(3.2)反復提取步驟一次，歸并兩次乙腈提取液，往提取液中插手正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去基層正己烷溶液，再在乙腈層插手正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去基層正己烷溶液，轉移基層乙腈溶液至另外一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)從頭消融、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.2洗面奶、洗澡液類化裝品

　　稱取樣品0.2g(切確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，插手1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再插手3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋夾雜器上使樣品分離，插手3mL乙醚(3.5)，充實渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出基層清液于另外一10mL具塞塑料離心管中，基層氯化鈉飽和溶液用3mL乙醚(3.5)反復提取步驟一次，歸并兩次乙醚提取液，用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)2mL從頭消融，再插手8mL純水濃縮。

　　HLB固相萃取小柱(3.7)，接上固相萃取裝配，小柱事后用10mL甲醇、10mL水停止活化、均衡。將待污染的樣品溶液傾倒入固相萃取小柱，待樣品溶液天然流盡后，順次用10mL純水、5mL10%甲醇溶液淋洗小柱;待淋洗液天然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液，用10mL5%氨水甲醇溶液(3.10)洗脫固相萃取小柱，搜集洗脫液，40℃水浴下經氮氣吹至近干，用30%甲醇水溶液(3.8)從頭消融、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.3指甲油與口紅類化裝品

　　稱取樣品0.2g(切確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，插手1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再插手3mL乙腈(3.2)，于渦旋夾雜器上使樣品分離消融，充實渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，取基層清液于另外一10mL具塞塑料離心管中，基層樣品殘渣再用3mL乙腈(3.2)反復提取步驟一次，歸并兩次乙腈提取液，往提取液中插手正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去基層正己烷溶液，再在乙腈層插手正己烷2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去基層正己烷溶液，轉移基層乙腈溶液至另外一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液從頭消融、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　測定

　　液相色譜參考前提

　　以下為液相色譜參考前提：

　　色譜柱：C18，1.7：相，100mm2.1mm(內徑)，或相稱者

　　柱溫：40℃;

　　活動相：0.3%甲酸水溶液 乙腈=75 25

　　洗脫法式：等度;

　　流速：0.5mL/min;

　　進樣量：2μL;

　　質譜參考前提

　　以下為質譜參考前提：

　　電離源形式：電噴霧離子化;

　　電離源極性：正離子形式;

　　霧化氣：氮氣;

　　霧化氣壓力：45psi;

　　毛細管電壓：3500V;

　　枯燥氣溫度：325℃;

　　枯燥氣流速：5L/min;

　　鞘氣溫度：400℃;

　　鞘氣流速：12L/min;

　　監測方式：多反映監測(MRM)

　　分辯率：Q1(unit)Q3(unit);

　　質譜測定參數見表1;質譜判定的允差見表2。

　　表1　4-氨基聯苯及其內標物的保留時候、監測離子對、源內裂解電壓、碰撞氣能量

　　闡發物保留時候

　　/min母離子子離子源內裂解電壓(V)碰撞氣能量(V)

　　4-氨基聯苯-D91.069179*15915033

　　4-氨基聯苯1.139170.1*1527530

　　937530

　　注1：*定量離子

　　表2　定性肯定時相對離子品貌的最大許可誤差

　　相對離子品貌/%>50>20～50>10～20≤10

　　許可的相對誤差/%±20±25±30±50

　　標準曲線的繪制

　　以空缺基質加標峰面積與內標峰面積比值為縱坐標，空缺基質加標濃度與內標物濃度的比值為橫坐標，建造標準曲線。

　　計較

　　試樣中4-氨基聯苯的含量，按式(1)計較

　　w=………….………………………….(1)

　　式中:

　　w——試樣中4-氨基聯苯及其鹽的含量，以4-氨基聯苯計，單元為微克每公斤(µg/kg);

　　ρ——4-氨基聯苯氘代同位素內標的品德濃度，單元為納克每毫升(ng/mL);

　　R——從標準曲線上查出測試溶液中4-氨基聯苯與同位素內標的品德濃度比值;

　　V——樣品定容體積，單元為毫升(mL);

　　m——樣品的品德，單元為克(g)。

　　8精密度

　　在反復性前提下取得的兩次自力測試成果的相對差值不大于這兩次測定值的算術均勻值的10%。

　　9色譜圖與質譜圖

　　圖1：純標樣(4-氨基聯苯、4-氨基聯苯-D9)多反映監測(MRM)闡發提取離子流圖

　　1.4-氨基聯苯-D9(1.069min);2.4-氨基聯苯(1.139min)

　　圖2：4-氨基聯苯及其內標4-氨基聯苯-D9的子離子掃描質譜圖