在停止梯度洗脫時，由于多種溶劑夾雜，并且構成不時變更，是以必然帶來一些出格的題目，咱們必須充實地正視。

　　1、要注重溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的活動相。有些溶劑在必然的比例內互溶，超越必然的規模后就不會互溶。比方：乙腈和1mol/L的醋酸銨(pH5.16)做梯度洗脫，乙腈含量跨越70%時就會呈現不溶，甲醇和已烷夾雜，甲醇含量高于30%時就會分層等。當無機溶劑緩和沖溶液夾雜時還能夠析出鹽的結晶體，出格利用磷酸鹽時需出格謹慎。

　　2、梯度洗脫所用的溶劑純度請求更高，以保障好的重現性。停止樣品闡發前必須停止空缺梯度洗脫，以辯認溶劑雜質峰，由于弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭上后會被強的溶劑洗脫出來。用于梯度洗脫的溶劑需完整脫氣，以避免溶劑夾雜時發生氣泡。

　　3、夾雜溶劑的粘度常隨構成而變更，是以在梯度洗脫經常會呈現壓力變更，比方純水或甲醇的粘度都比擬小，可是當兩者以附近的比例夾雜時粘度會增大良多，此時的柱壓是純水或甲醇為活動相時的兩倍。是以要注重避免梯度洗脫進程中壓力跨越輸液泵或色譜柱所能蒙受的最大壓力。

　　4、每次梯度洗脫以后必須對色譜柱停止再生處置，使其規復到初始的狀況。需讓10～30倍柱容積的初始活動相流經色譜柱，使牢固相與初始活動相到達完整均衡。