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提取植物構造DNA的方式
[2011/6/14]
【嘗試步驟】
1.構造塊凍結,用心理鹽水洗去血污,剪取約0.5g構造,剪小放入2.0ml離心管中,用FM-200P研磨45秒;
2.插手0.45ml TES混勻,再插手50ul SDS(10%),5.0ul卵白酶K(20mg/ml),充實混勻后,于56°C保溫4-6h,每2h搖1次。
3.安排到室溫,插手等體積飽和酚(500ul),倒置混勻,10000r/m,離心10m,分手水相和無機相,謹慎吸收下層含核酸的水相,到一個新的1.5ml離心管。
4.插手等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),倒置混勻,10000r/m,離心10分鐘,取下層轉移到新的1.5/2.0ml離心管中;
5.插手等體積氯仿:異戊醇(24:1),倒置混勻,10000r/m,離心10分鐘,取下層清液到一個新的1.5/2.0ml離心管;
6.插手2.5倍體積的-20°C預冷的無水乙醇積淀DNA,察看景象。
7.12000 r/m,離心10分鐘,棄乙醇;
8.-20°C保管的75%乙醇洗濯,10000 r/m,離心5分鐘,去乙醇,55°C枯燥DNA;
9.插手適當TE消融DNA(詳細依DNA的幾多而定),-20°C保管備用;
【注重事變】
1.抽提每步使勁要溫和,避免機器剪切力對DNA的毀傷。
2.取下層清液時,注重不要吸起中間的卵白質層。
3.乙醇漂洗去乙醇時,不要蕩起DNA。
4.離心后,不要晃悠離心管,拿管要穩,斜面朝外。
1.構造塊凍結,用心理鹽水洗去血污,剪取約0.5g構造,剪小放入2.0ml離心管中,用FM-200P研磨45秒;
2.插手0.45ml TES混勻,再插手50ul SDS(10%),5.0ul卵白酶K(20mg/ml),充實混勻后,于56°C保溫4-6h,每2h搖1次。
3.安排到室溫,插手等體積飽和酚(500ul),倒置混勻,10000r/m,離心10m,分手水相和無機相,謹慎吸收下層含核酸的水相,到一個新的1.5ml離心管。
4.插手等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),倒置混勻,10000r/m,離心10分鐘,取下層轉移到新的1.5/2.0ml離心管中;
5.插手等體積氯仿:異戊醇(24:1),倒置混勻,10000r/m,離心10分鐘,取下層清液到一個新的1.5/2.0ml離心管;
6.插手2.5倍體積的-20°C預冷的無水乙醇積淀DNA,察看景象。
7.12000 r/m,離心10分鐘,棄乙醇;
8.-20°C保管的75%乙醇洗濯,10000 r/m,離心5分鐘,去乙醇,55°C枯燥DNA;
9.插手適當TE消融DNA(詳細依DNA的幾多而定),-20°C保管備用;
【注重事變】
1.抽提每步使勁要溫和,避免機器剪切力對DNA的毀傷。
2.取下層清液時,注重不要吸起中間的卵白質層。
3.乙醇漂洗去乙醇時,不要蕩起DNA。
4.離心后,不要晃悠離心管,拿管要穩,斜面朝外。
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