一、分光光度計的任務道理
  分光光度法是按照被測物資份子對紫外、可見波段規模單色輻射的接收或反射強度來停止物資的定性、定量或布局闡發的一種體例。
  物資顯現特色的色彩，這是因為它們對可見光中某些特定波長的光芒遴選性接收的原因。現實上，統統物資城市對可見光和不可見光中的某些波長的光芒停止接收。可是，統統光芒并不都因此不異的水平被物資接收的。物資對差別波長的光芒表現差別的接收才能，叫做遴選性接收。各類物資對光芒的遴選性接收這一性子，反映了它們份子外部布局的差別，即各類物資的外部布局決議了它們對差別光芒的遴選接收。
  朗伯-比耳定律 （Lambert-Beer）是幾近一切的光學闡發儀器的根基任務道理，它由朗伯定律和比耳定律歸并而成。 
          朗伯定律標明：若是溶液的濃度必然，則光對物資的接收水平與它經由進程的溶液厚度成反比。 
          比耳定律標明：若是吸光物資溶于不吸光的溶劑，則吸光度和吸光物資的濃度成反比。 
二者分解后的數學抒發式以下： 
      T=I/I。 （1） 
      A=KCL=‐㏒ I/Io （2） 
此中 
    T 透過率 
    A 吸光度 
    C 溶液濃度 
    K 溶液的吸光系數 
    L 液層在光路中的長度  
    I 光透過被測試樣后照耀到光電轉換器上的強度 
    Io 光透過參比測試樣后照耀到光電轉換器上的強度 

二、產物范例布局：

光度計
      可見分光光度計  
           紫外/可見分光光度計    
                 掃描型紫外/可見分光光度計
                        雙光束紫外/可見分光光度計 

三、儀器手藝參數詮釋
     波長規模：儀器可選波長的丈量規模。差別的物資接收所對應的接收波長不一樣。 
    氘燈：紫外光源                    185-400nm 
    鎢燈：可見和近紅外光源      250---2000nm              
   光譜帶寬：今朝國際上對光譜帶寬的測試體例普通用“譜線表面法”，首要是選用某些光源的特色譜線，對它停止光譜掃描，繪出該譜線的表面，再測出該譜線的半峰高的寬度即為光譜帶寬（又稱天然光譜帶寬）。儀器利用的光譜帶寬凡是要比天然光譜帶寬小10倍以上。
    波  長  準  確  度：也叫波長精度，是波長的現實測定值與實際值的差值。
   波  長  重  復  性：屢次丈量（普通是3次）最大值與最小值之間的差值。
   光  度  準  確  度：光度丈量值與光度實際值之差。 
   影響光度精確度的首要身分： 
      ①雜散光      ②光度噪聲      ③基線平直度 
      ④光譜帶寬  ⑤試樣來歷      ⑥試樣制備 
      ⑦比色皿 
   光  度  重  復  性：屢次丈量（普通是3次）最大值與最小值之間的差值。  
   影響光度反復性的首要身分： 
      ①光源體系（氘燈、鎢燈）       
      ②光電轉換器體系 
      ③電源體系       
      ④情況 
  雜    散    光：差別于測試所需要的波長的光叫做雜散光。 

影響雜散光的首要身分： 
  ①塵埃沾污光學元件   ②隔板邊緣的反射 
  ③光學體系屏障不好   ④狹縫的缺點 
  ⑤光束孔徑不婚配       ⑥光學體系的像差 
  ⑦單色器內壁黑化處置不妥   等等 

      雜散光對闡發測試成果的偏差影響是跟著吸光度值增大而增大的，會使成果偏離比耳定律。 
       
      ·雜散光被試樣接收時，偏離是正值。 
      ·雜散光不被試樣接收時，偏離是負值。  

穩    定    性：不變性包含基線漂移和光度反復性。 
       
基線漂移是指冷態開機預熱2小時后調零，試劑和參比比色皿都為氛圍，在牢固波長（500nm）下持續測定吸光度1小時，最大值和最小值之差。 
光度噪聲（噪聲）： 
      
       噪聲是指冷態開機預熱0.5小時后調零，試劑和參比比色皿都為氛圍，在500nm下持續測定吸光度1小時，偏離零點的最大值。 
      基線平直度： 
      基線平直度是指冷態開機預熱0.5小時后調零，從長波長向短波長對儀器停止全波長慢速掃描吸光度，偏離零點的最大值。 
吸光度和透過率的干系：透過率和吸光度是一一對應的干系，干系式以下： 
A=2 – lgT% 
此中    A為吸光度 
           T為透過率 
        若T=100%，A = 2 - lg100 = 2 - 2 = 0 
        若T=10%  ，A = 2 - lg10   = 2 - 1 = 1 
光度闡發：牢固波長下測定樣品的吸光度和透過率。 

定量闡發：經由進程對已知濃度的樣品停止吸光度的測定，建造規范曲線，得出曲線的線性方程C=KA+b。再測定未知樣品的吸光度，經由進程線性方程求出樣品的濃度。 
能源學測試：牢固波長下，測定樣品在一段時候內吸光度或透過率的變更圖譜，可計較樣品的反映率△A/t。 
       
    需設定的參數： 
         掃描時候，最多9小時； 
         采樣距離，最小為0.5秒； 
         延時時候 
         掃描波長 
全波長掃描：在儀器波長規模內，設定肆意波長區間，對未知試樣停止吸光度、透過率的圖譜掃描。 
       
     需設定的參數： 
         掃描波長規模 
         掃描距離，0.1、0.2、0.5、1、2、5nm； 
         掃描速率，倡議為低速； 
         T/A形式 
圖譜處置 
     圖譜減少、減少、峰谷檢測、光滑等處置； 
     圖譜存儲和挪用； 
     利用PC版軟件可停止1-4階求導、四則運算、疊加等闡發。
多波長測試：對某一待測物資在多個波長點停止吸光度、透過率測試。 
  
    單機版可測試10個波長點； 
      PC版可測試32個波長點。
DNA/卵白質測試 
    測試波長缺省值為260、280、320nm，可點竄。 
    可計較DNA、Protein的濃度和Ratio。 

單光束分光光度計特色：布局簡略、價錢自制 

雜散光、光度噪聲、光譜帶寬等首要手藝目標差，不合合用于手藝請求較高的行業，如制藥、科研、品德查驗行業。 
準雙光束分光光度計特色：布局較簡略、價錢較自制。 
有一束作為參考光束，能局部對消光源振動、電子學噪聲，以進步儀器的不變性。 
只要一個比色皿，不能對消雜散光。
雙光束雙轉換器分光光度計特色：能局部對消光源動搖、雜散光、電噪聲的影響，光度精確好； 
布局較龐雜、價錢高貴； 
因一束光分為兩束，每束光的能量低，信噪比不如單光束光度計好； 
兩個轉換器不能完整婚配，故掃描丈量偏差大，不倡議用來做光譜掃描。
雙光束單檢測器分光光度計特色：能局部對消光源動搖、雜散光、電噪聲的影響，光度精確好、手藝目標很進步前輩； 
布局較龐雜、價錢高貴； 
因一束光分為兩束，每束光的能量低，信噪比不如單光束光度計好。但兩束光路對噪聲可彼此對消，活絡度依然很好。 

四、分光光度計的評估和遴選：
    合用性 
    靠得住性 
    智能型 
    經濟性 
    美學性 
    工藝性 
適    用    性：合用性—知足利用請求的水平，首要由手藝目標所決議。 
波長精確度： 
對普通的定量闡發，波長精確度不是很首要； 
對差別試樣停止比對測試時，波長精確度就相稱首要。 

雜散光： 
      在闡發的試樣較多，濃度較大時很首要。 

雜散光必然時，闡發測試的數據會跟著濃度的增大，偏離比耳定律的水平就越大，故看待測試樣的濃度上限有嚴酷請求； 
闡發種類較多的食物、農業等范疇，必須遴選雜散光小的儀器。 

光度噪聲： 
      闡發測試偏差的首要來歷，且限定被闡發試樣濃度的上限。 

光度噪聲必然時，濃度越低，闡發測試的數據的偏差就越大，故看待測試樣的濃度上限限定較大； 
生化、陸地研討等范疇，必須遴選光度噪聲小的儀器。 
光譜帶寬 

普凡是規的在可見光區的闡發任務，帶寬普通遴選4nm； 
用于制藥行業的藥檢，光譜帶寬在2nm或以下； 
科研任務倡議遴選可調帶寬的儀器。 
可    靠    性：從狹義上講，靠得住性便是儀器的毛病率。 

從狹義上講，靠得住性應從分光光度計的建造和利用兩個方面權衡，包含光度精確度、不變性、毛病率及售后辦事等外容。 

影響靠得住性的身分：起首要查抄本身對儀器前提（如光譜帶寬、掃描速率、采樣距離、標尺設定等）的遴選是不是得當，是不是對儀器停止了調零、基線校訂、暗電流校訂等； 
要嚴酷查抄影響儀器光度精確度的首要目標：雜散光、光學元件（特別是舊機械）、光度噪聲、基線平直度； 
查抄比色皿是不是被凈化； 
查抄四周有沒有攪擾源，首要是電和磁的攪擾； 
查抄試樣制備的進程； 
查抄試樣是不是過時等等。